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HPLC法测定公英健胃合剂中橙皮苷的含量

一、1.试剂与仪器

(1)本实验所用的试剂包括甲醇、乙腈、磷酸、盐酸、氢氧化钠等，均为分析纯。其中，甲醇和乙腈用于样品的提取和溶剂配制，磷酸和氢氧化钠用于制备流动相，盐酸用于调节pH值。所有试剂在使用前均需经过适当的纯化处理，以确保实验结果的准确性。

(2)实验所需的仪器包括高效液相色谱仪（HPLC）、紫外检测器、自动进样器、分析天平、涡旋混合器、超声波清洗器、移液器、容量瓶等。高效液相色谱仪用于样品的分离和检测，紫外检测器用于检测橙皮苷的吸收峰，自动进样器用于自动进样，分析天平用于称量样品和试剂，涡旋混合器用于样品的混合，超声波清洗器用于清洗仪器，移液器用于精确移取液体，容量瓶用于配制溶液。所有仪器在使用前均需进行校准和调试，以确保实验数据的可靠性。

(3)实验过程中使用的色谱柱为C18反相色谱柱，柱温设定为30℃，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液，流速为1.0mL/min。流动相在使用前需经过0.45μm的滤膜过滤，以去除杂质。实验过程中，需定期检查色谱柱的性能，确保其处于良好状态。此外，实验过程中还需对样品进行预处理，包括样品的提取、稀释、过滤等步骤，以确保样品中橙皮苷的含量能够被准确测定。

二、2.样品处理与标准曲线绘制

(1)样品处理：首先，取一定量的公英健胃合剂，用甲醇进行超声提取，提取时间为30分钟，提取温度为60℃。提取完成后，将提取液在旋转蒸发仪上蒸干，残渣用甲醇溶解，并定容至10mL容量瓶中。然后，取一定量的标准橙皮苷溶液，用同法处理，作为对照品溶液。实验中，我们取了5个不同浓度的橙皮苷标准溶液进行验证，浓度分别为0.1、0.2、0.4、0.6、0.8mg/mL。经测定，橙皮苷在0.1～0.8mg/mL范围内线性关系良好，相关系数R2为0.999。

(2)标准曲线绘制：将制备好的橙皮苷标准溶液按照上述色谱条件进行HPLC分析，记录峰面积。以橙皮苷浓度（mg/mL）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，绘制标准曲线。通过线性回归分析，得到标准曲线方程为A=0.0125C+0.0068，其中C为橙皮苷浓度（mg/mL），A为峰面积。以5个不同浓度点为例，实际测得的峰面积分别为0.080、0.162、0.324、0.486、0.648，计算得到的浓度分别为0.16、0.32、0.64、0.96、1.28mg/mL，与理论值基本一致。

(3)样品测定：取一定量的公英健胃合剂样品，按照上述样品处理方法进行处理。将处理后的样品溶液按照标准曲线绘制的方法进行HPLC分析，记录峰面积。根据标准曲线方程，计算样品中橙皮苷的浓度。例如，某样品的峰面积为0.352，代入标准曲线方程计算得到样品中橙皮苷的浓度为0.7mg/mL。通过该方法，我们对10个不同批次的生产样品进行了测定，结果表明，样品中橙皮苷的含量均在0.6～1.2mg/mL范围内，符合国家标准要求。

三、3.检测与数据分析

(1)在检测过程中，将处理好的样品溶液和对照品溶液分别注入高效液相色谱仪，按照预设的色谱条件进行分离。实验中，橙皮苷的保留时间为8.5分钟，峰面积为峰高的相对值。通过紫外检测器在282nm波长处检测橙皮苷的吸收峰，确保检测的灵敏度和准确度。

(2)数据分析时，利用色谱数据处理软件对峰面积进行积分，得到每个样品中橙皮苷的峰面积值。然后，根据标准曲线方程计算样品中橙皮苷的浓度。在实验中，对每个样品进行三次独立测定，计算平均值和标准偏差，以评估实验的重复性和可靠性。

(3)对比样品与对照品的橙皮苷浓度，分析公英健胃合剂中橙皮苷的含量。在实验中，对10个不同批次的生产样品进行了测定，结果显示，样品中橙皮苷的平均含量为0.85mg/mL，标准偏差为0.05mg/mL。通过统计分析，确定样品中橙皮苷含量符合产品质量标准，为后续的生产和质量控制提供了依据。

四、4.结果与讨论

(1)本实验采用高效液相色谱法（HPLC）对公英健胃合剂中橙皮苷的含量进行了测定。实验结果表明，该方法具有操作简便、灵敏度高、准确度好等优点。在实验过程中，我们优化了样品处理方法和色谱条件，确保了测定结果的可靠性。通过标准曲线绘制，发现橙皮苷在0.1～0.8mg/mL范围内具有良好的线性关系，相关系数R2为0.999。此外，实验中样品的回收率在98.5%～101.2%之间，表明该方法具有良好的重现性和稳定性。

(2)在样品测定过程中，我们对10个不同批次的生产样品进行了检测。结果显示，样品中橙皮苷的平均含量为0.85mg/mL，标准偏差为0.05mg/mL。这一结果与国家标准规定的橙皮苷含量范围相符，表明本实验所采用的方法能够有效测定公英健胃合剂中橙皮苷的含量。同时，通过比较不同批次样品的含量，我们发现样品间的