光谱分析技术(好资料).ppt

吸光系数：当溶液浓度c的单位为g/L,溶液液层厚度b的单位为cm时，K叫“吸光系数”，用a表示，其单位为L·g-1·cm-1摩尔吸光系数：当溶液浓度c的单位为mol/L，液层厚度b的单位为cm时，K叫“摩尔吸光系数”，用ε表示，其单位为L·mol-1·cm-1ε=aM(M为吸光物质的分子量)朗伯-比尔定律紫外-可见分光光度计工作原理基仪器结构框图光源碘钨灯氘灯单色器测量池参比池样品池光电倍增管数据处理和仪器控制光源样品池单色器检测器数据处理仪器控制紫外-可见分光光度计单光束分光光度计双光束分光光度计紫外-可见分光光度计紫外-可见分光光度计”吸收池的材料01玻璃02360nm03mm04紫外-可见分光光度计01石英03mm02200nm紫外-可见分光光度计吸收池的形状可拆卸圆形测量池两面透光圆形测量池两面透光1cm长方形测量池两面透光气体测量池两面透光微量测量池两面透光流动测量池两面透光思考题生物分子的紫外-可见吸收光谱糖1紫外可见光谱在糖的分析中,主要作定量检测。最大吸收波长为218nm,多糖最大吸收波长为206nm。23生物分子的紫外-可见吸收光谱脂01脂肪020304230~240nm,于有机溶剂中（如乙醇、正己烷等）05生物分子的紫外-可见吸收光谱01类脂维生素A326nm于乙醇020304番茄红素番茄红素在溶剂正己烷中的谱图番茄红素在溶剂石油醚中的谱图0506生物分子的紫外-可见吸收光谱蛋白质1Proteinsinsolutionabsorbultravioletlightwithabsorbancemaximaat280and200nm.Aminoacidswitharomaticringsaretheprimaryreasonfortheabsorbancepeakat280nm.Peptidebondsareprimarilyresponsibleforthepeakat200nm.2酪氨酸3色氨酸4苯丙氨酸5核酸生物分子的紫外-可见吸收光谱嘌呤和嘧啶在250～280nm有强的吸收作用，综合起来在260nm吸收值最大。Tips：1.吸收强度：单核苷酸单链DNA双链DNA（增色效应、减色效应）2.A260/A280＝1.8～2.0，DNA较纯A260/A2801.8，DNA样品中含有蛋白质A260/A2802.0，DNA样品中含有RNA微生物的紫外-可见吸收光谱600nm测细菌等微生物的浊度，用于估计细菌的生长情况。比如，得到的OD600的数值如果在之间，表明细菌处于旺盛生长的对数生长期，OD6003表明细菌已经饱和等。核酸蛋白测定仪EppendorfBioPhotometerplusELISA原理图①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂）②酶标记的抗原或抗体（标记物）③酶作用的底物（显色剂）酶标仪酶标仪TecanInfinite?200Pro多功能酶标仪ELISA分子荧光光谱01某些物质经紫外-可见光照射后，能立即放出能量较低（亦即波长较长）的光——光致发光。02当照射停止后，如化合物的发射在10-9秒钟内停止，则称荧光(fluorescence);03超过此限度即称为磷光(phosphorescence)。什么是荧光光谱什么是荧光光谱基本原理Ee0Ev0Ev1Ev2Ev3Ev4Ee1Ee2荧光发射：当分子处于单重激发态的最低振动能层时，去活化的一种形式是以10-9~10-7s左右的短时间内发射光子返回基态，这一过程称为荧光发射。激发光谱01固定荧光发射波长，扫描激发波长02荧光激发光谱与紫外-可见吸收光谱类似，Why？横坐标是入射光（激发光）的波长，纵坐标是发射光（荧光）的强度激发光谱发射光谱(荧光光谱)发射光谱固定激发光波长，扫描发射波长横坐标是发射光（荧光）的波长，纵坐标是发射光（荧光）的强度010204蒽的激发光谱固定发射波长、扫描激发波长IF∝f(λex、λem)2.三维荧光光谱蒽的发射光谱1固定激发波长、扫描发射波长2IF∝f(λex、λem)蒽的三维等高线光谱图蒽的三维等荧光强度光谱荧光量子产率（荧光效率）kF为荧光发射过程的速率常数，取决于荧光物质的分子结