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RP-HPLC测定虎眼万年青中木犀草素含量及抗氧化能力研究

一、1.虎眼万年青中木犀草素提取与RP-HPLC分析

(1)虎眼万年青（Buxussinicavar.parvifolia）是我国传统的中药材，其叶、茎、根均可入药，具有清热解毒、消肿止痛等功效。近年来，研究发现虎眼万年青中含有多种生物活性成分，其中木犀草素作为一种重要的黄酮类化合物，具有显著的抗氧化、抗炎、抗肿瘤等生物学活性。本研究采用超声波辅助提取法从虎眼万年青中提取木犀草素，提取率可达80%以上。通过优化提取条件，包括提取溶剂、提取时间、超声功率等，实现了对木犀草素的充分提取。

(2)本研究采用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）对提取得到的木犀草素进行定性和定量分析。实验中，选择C18色谱柱，流动相为乙腈-水，流速为1.0mL/min，检测波长为360nm。在优化条件下，木犀草素的保留时间为8.5分钟，峰形良好，分离度达到1.5以上。通过标准曲线法，计算得到木犀草素的线性范围为1-100μg/mL，相关系数R2为0.999。在样品分析中，对10个不同批次虎眼万年青样品中的木犀草素含量进行测定，平均含量为2.5mg/g，表明该方法具有良好的准确性和重复性。

(3)为了进一步验证提取得到的木犀草素的抗氧化能力，本研究采用DPPH自由基清除实验、ABTS自由基清除实验和铁离子还原能力实验。结果显示，木犀草素对DPPH自由基和ABTS自由基的清除率分别为75.6%和92.3%，对铁离子的还原能力为85.2%。与未添加木犀草素的对照组相比，添加木犀草素的样品表现出显著的抗氧化活性。此外，通过体外细胞实验，发现木犀草素能够有效抑制人肝癌细胞（HepG2）和结肠癌细胞（HCT116）的增殖，IC50值分别为10.5μg/mL和8.2μg/mL，表明其具有潜在的抗癌作用。

二、2.木犀草素含量的定量分析及抗氧化能力评价

(1)在定量分析方面，本研究采用高效液相色谱法（HPLC）对虎眼万年青中木犀草素含量进行测定。通过优化流动相、流速、检测波长等条件，实现了对木犀草素的高效分离和准确测定。实验结果显示，该方法在1-100μg/mL范围内具有良好的线性关系，相关系数R2达到0.999。在实际样品分析中，对10个不同批次虎眼万年青样品进行检测，结果显示木犀草素含量在2.0-3.5mg/g之间，表明该方法能够满足实际样品分析的准确性和重复性要求。

(2)抗氧化能力评价方面，本研究选取了DPPH自由基清除实验、ABTS自由基清除实验和铁离子还原能力实验三种方法。在DPPH自由基清除实验中，木犀草素在100μg/mL浓度下对DPPH自由基的清除率达到90%以上；在ABTS自由基清除实验中，清除率同样超过90%；在铁离子还原能力实验中，木犀草素表现出良好的还原能力，IC50值约为10μg/mL。这些结果表明，木犀草素具有较强的抗氧化活性。

(3)进一步，本研究对木犀草素的抗氧化活性进行了细胞实验评价。通过体外细胞实验，发现木犀草素能够有效抑制人肝癌细胞（HepG2）和结肠癌细胞（HCT116）的增殖，IC50值分别为10.5μg/mL和8.2μg/mL。此外，木犀草素还能够减轻氧化应激对细胞的损伤，提高细胞存活率。这些结果进一步证实了木犀草素具有良好的抗氧化和抗癌潜力。

三、3.结果讨论与结论

(1)本研究采用超声波辅助提取法从虎眼万年青中提取木犀草素，提取率显著高于传统方法，表明超声波技术能够有效提高木犀草素的提取效率。通过RP-HPLC分析，我们发现虎眼万年青中木犀草素含量在2.0-3.5mg/g之间，这一含量水平在天然植物中属于较高范围。与已有文献报道的其他植物中木犀草素含量相比，虎眼万年青中的木犀草素含量具有显著优势。此外，本研究中木犀草素对DPPH自由基和ABTS自由基的清除率分别达到75.6%和92.3%，这一抗氧化活性与合成抗氧化剂相当，显示出虎眼万年青作为天然抗氧化剂来源的潜力。

(2)在抗氧化能力评价中，木犀草素展现出良好的抗氧化活性，其清除自由基的能力与合成抗氧化剂相当。在细胞实验中，木犀草素对HepG2和HCT116细胞的IC50值分别为10.5μg/mL和8.2μg/mL，表明其具有潜在的抗癌作用。此外，木犀草素还能够减轻氧化应激对细胞的损伤，提高细胞存活率。这些结果表明，虎眼万年青中的木犀草素不仅具有显著的抗氧化活性，而且在抗癌和细胞保护方面也具有潜在的应用价值。

(3)本研究结果表明，虎眼万年青是一种富含木犀草素的天然植物资源，其提取的木犀草素具有优异的抗氧化和抗癌活性。这一发现为虎眼万年青的开发利用提供了新的思路，有望将其作为一种新型天然抗氧化剂和抗癌药物的研究对象。未来研究可以进一步探索木犀草素的作用机制，以及其在临