植物生理学实验课件.ppt

植物呼吸强度的测定

（小篮子法）实验结果死种子装置滴定所耗草酸量（V0）：活种子装置滴定所耗草酸量（V1）：呼吸强度（CO2，mg/g·h）=（V0－V1）/种子鲜重（g）×时间（h）第62页,共85页，星期六，2024年，5月过氧化物酶活性的测定实验原理过氧化物酶广泛存在于植物的各个组织器官中。在有过氧化氢存在下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，可用分光光度计测量生成物的含量。第63页,共85页，星期六，2024年，5月过氧化物酶活性的测定实验器材与试剂实验仪器分光光度计，离心机，天平，研钵实验试剂愈创木酚，30%过氧化氢，20mmol/LKH2PO4，100mmol/L磷酸缓冲液（pH6.0），反应混合液[100mmol/L磷酸缓冲液（pH6.0）50mL，加入愈创木酚28μL，加热搅拌至愈创木酚溶解，冷却后加入30%过氧化氢19μL，混合均匀，保存于冰箱中]实验材料马铃薯块茎第64页,共85页，星期六，2024年，5月过氧化物酶活性的测定实验步骤粗酶液的提取称取去皮马铃薯块茎1g，加20mmol/LKH2PO45mL，于研钵中研磨成均浆，以4000r/min离心15min，收集上清液保存于冷处，所得残渣在用5mLKH2PO4溶液提取一次，合并两次上清液。酶活性的测定取比色杯2只，于一只中加入反应混合液3mL，KH2PO41mL，作为校零对照，另一只中加入反应混合液3mL，上述酶液1mL，立即于分光光度计470nm测量OD值，每隔1min读数一次。以每分钟OD变化值表示酶活性大小。第65页,共85页，星期六，2024年，5月过氧化物酶活性的测定实验结果ΔOD470/min·鲜重g=次数12345678910OD470第66页,共85页，星期六，2024年，5月种子活力的快速测定

（氯化三苯基四氮唑法，TTC法）实验原理凡有生命力的种子胚部，在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生命活力的种胚则无此反应。当TTC渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH或NADPH）上的氢还原时，便由无色TTC变为红色的TTF。第67页,共85页，星期六，2024年，5月种子活力的快速测定

（氯化三苯基四氮唑法，TTC法）实验器材与试剂实验仪器恒温箱，烧杯，培养皿，镊子，刀片实验试剂0.5%TTC溶液实验材料大麦、小麦、籼谷或粳谷的种子第68页,共85页，星期六，2024年，5月种子活力的快速测定

（氯化三苯基四氮唑法，TTC法）实验步骤浸种将待测种子在30～35℃温水中浸种，以增强种胚的呼吸强度。显色取吸胀种子100粒，，用刀片沿种子胚的中心线纵切为两半，将其中的一半置于培养皿中，加入适量的0.5%TTC溶液覆盖种子。然后置于30℃恒温箱中1h。观察结果。将另一半在沸水中煮5min杀死胚，作同样染色处理，作为对照观察。第69页,共85页，星期六，2024年，5月种子活力的快速测定

（氯化三苯基四氮唑法，TTC法）实验步骤计算活种子的百分数。实验结果煮沸杀死的种子胚部均为白色。未煮沸杀死的种子胚部大部分为红色，少数为白色。活种子的百分率为：第70页,共85页，星期六，2024年，5月种子活力的快速测定

（红墨水法）实验原理凡活细胞的原生质膜具有选择性吸收物质的能力，而死的种子胚细胞原生质膜丧失这种能力，于是染料便能进入死细胞而染色。第71页,共85页，星期六，2024年，5月种子活力的快速测定

（红墨水法）实验器材与试剂实验仪器恒温箱，烧杯，培养皿，镊子，刀片实验试剂5%红墨水实验材料大麦、小麦、籼谷或粳谷的种子第72页,共85页，星期六，2024年，5月种子活力的快速测定

（红墨水法）实验步骤浸种将待测种子在30～35℃温水中浸种，以增强种胚的呼吸强度。显色取吸胀种子100粒，用刀片沿种子胚的中心线纵切为两半，将其中的一半置于培养皿中，加入5%红墨水淹没种子。染色10～15min。倒去红墨水，用水冲洗种子，至冲洗液无色，观察结果。第73页,共85页，星期六，2024年，5月种子活力的快速测定

（红墨水法）实验步骤将另一半在沸水中煮5min杀死胚，作同样染色处理，作为对照观察。计算活种子的百分数。实验结果煮沸杀死的种子胚与胚乳均染上红色。未煮沸杀死的种子胚部大部分为白色或浅红色，少数为红色。活种子的百分率为：