动物组织与胚胎工程.ppt

01胚胎移植的生理学基础02胚胎移植的基本原则（二）胚胎移植的生理基础及原则1.胚胎移植的生理学基础成年母畜卵巢上存在数千到上万个卵泡，在外源激素作用下，每个发情期的卵泡发育和排卵数可达十数个每个发情周期生殖器官都有一个孕向发育早期胚胎处于游离状态胚胎发育不存在免疫问题胚胎发育到一定阶段会与子宫发生生理和组联系胚胎的遗传性不受受体的影响胚胎移植前后所处的环境的同一性供体和受体在分类学上的相同属性动物生理上的一致性：受体和供体在发情时间上的同期性动物解剖位置上的一致性：空间环境的一致性胚胎的发育期限：必须处于周期黄体期内胚胎的质量：胚胎必须是正常的，并在处理过程中不受不良因素的影响供体和受体的选择超数排卵处理供体母畜的配种胚胎的收集胚胎的移植胚胎的检查胚胎的保存与培养供体和受体的术后观察（三）、胚胎移植的技术程序01供体应具有相当高的育种价值02供体生殖机能应处于较高的状态：产后60天以上，无生殖系统疾病，体质强健03受体应容易购买，繁殖性能好，对地方适应性强，体型中上等，非优良品种04受体健康状况良好，已进入发情季节05供受体发情时间应接近或一致1.供体和受体的选择2.超数排卵处理利用促性腺激素处理，使得卵巢中有更多的卵泡发育，更多的卵被排出，这个过程就称为超数排卵（superovulation）意义：让每个供体提供更多的胚胎处理时间：牛：预计自然发情时间的前4天，或发情周期的第16-17天羊：发情周期的第12-15天，促性腺激素处理的第二天或第三天，注射PG配种前应对种公畜的精液进行质量检查。可优秀种公畜不足时，可考虑首次采用本交，以后采用人工授精，也可以全部采用人工授精。必须用优秀的种公畜进行多次配种，一般隔8-12小时进行一次配种，直到发情结束。3.供体母畜的配种胚胎冲洗液的配制：杜氏磷酸缓冲液PBS，布林斯特液SOF合成输卵管液手术法收集胚胎输卵管冲胚：顺向冲胚、逆向冲胚子宫角冲胚非手术法收集胚胎12345三路法二路法4.胚胎的收集收集到的冲洗液静置，冲洗液分离。拣胚：将胚胎移至培养液或保存液中。胚胎鉴定：根据透明带、胚胎细胞、发育阶段及细胞在透明带中的比例确定胚胎级别。胚胎的检查二细胞至四细胞胚胎第十一章、动物组织与胚胎工程组织工程器官保存培养：维持器官的存活与功能组织培养：体外培养生成某些组织

组织修复：通过培养组织、移植或原位地进行坏损组织的修复。修复缺损器官的方法一般有自体移植、异体移植和组织代用器三种。人体组织由细胞及支撑细胞的细胞外间质构成extra-cellularmatrix)

细胞外间质组成包括：collagen,glycoprotein,hyaluronicacid,proteoglycan,elastin,fibronectin,growthfactors,cytokinesetc.组织工程的三要素

细胞、支架、信号Growthfactorstimulation细胞必须能不断进行细胞分裂，且必须能被调控分化成特定的组织细胞

干细胞：胚胎干细胞、成体干细胞

组织来源细胞自体或异体B、组织生长支架需求：生物亲和性

生物可降解性

三维内部连通孔隙

具备支架强度。磷酸钙基生物材料蛋白质支架01多糖支架0203硫酸钙基生物材料04表皮生长因子：是对上皮细胞增殖有很强促进作用的53个氨基酸残基的多肽。神经生长因子：为神经细胞特异性分泌的营养蛋白。肝细胞生长因子：为728个氨基酸残基单链组成。骨形态发生蛋白：能诱导或刺激新骨的生成。01020304C、生长因子技术路线体外得到工程化组织、移植——目前主要的方式

细胞与支架前体混合注射体内，原位形成凝胶支架，提供新组织形成的空间皮肤修复骨修复第一个组织工程产品人工皮肤已于1997年3月经美国FDA批准上市。这种产品是器官基因公司培养出的，被称为适移植的活性皮肤，它由新生儿的包皮细胞培植而成，呈层状结构，与正常人的皮肤极为相似，能分泌人体皮肤胶原、生长因子和结构性蛋白，可与病人自身的皮肤很好地融合，不存在排异作用，就连病人自身的血管和色素也会逐渐转移到适移植活性皮肤中去，愈后不留瘢痕。124、已取得成就2000年3月10日，AdvancedTissueSciences公司宣布成功研制出促进心肌血管形成的产品。该产品应用后14天即开始形成新的血管。据悉，用来修复或取代受损的人体软骨组织的组织工程产品人工软骨也即将上市。胚胎工程胚胎工程（embryoengineering）是指所有对配子和胚胎进行人为地干预，使其环境因素