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同工酶的定义同种生物体内催化相同反应的有关酶类称为同工酶同工酶分析一、同工酶产生的机理(一)由不同基因位点编码(二)由等位基因编码(三)由多肽链化学修饰产生
二、同工酶的测定方法(一)按照理化性质不同进行分离鉴定1.电泳法同工酶氨基酸组成不同,等电点不同,电泳迁移率也就不同,据此可用电泳法分离鉴定2.层析法根据同工酶分子荷电量不同,可用离子交换层析法加以分离
(二)按照底物专一性不同进行鉴定同工酶底物专一性不同,Km值也不同。如果同工酶之间的Km值差别足够大,可以通过测定其Km值加以鉴定(三)按照最适pH不同进行鉴定同工酶分子氨基酸组成不同,最适pH也不同。如果同工酶最适pH之间的差别足够大,可以通过调节缓冲溶液的pH值加以鉴定
(四)按照免疫学特性不同进行分离鉴定(五)按照耐热程度不同进行鉴定(六)选择性抑制法由于同工酶的一级结构不同,因而免疫化学性质也不同。利用纯化的同工酶免疫动物制备特异性的抗血清,此抗体只与该同工酶产生特异性免疫反应。因此,抗原决定簇不同的同工酶可用特异的免疫反应来识别。应用较多的免疫分析法有免疫抑制法、免疫沉淀法等。热失活分析法同工酶各亚型对抑制剂敏感程度不同,或同一抑制剂对不同同工酶有不同的抑制作用。
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