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分子诊断检验程序性能验证

上海市临床检验中心肖艳群

ß为什么要做性能验证？

ß需要验证哪些参数？

ß如何做性能验证？

ß性能验证常见问题及解决措施？

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u新冠病毒核酸检测系统（以RT-PCR为例）

Ø检测系统

（MeasurementSystem）ü料：核酸提取试剂、核酸检测试剂

完成一个检测项目需要的仪器、ü机：加样器、离心机、核酸提取仪、扩增仪

试剂、校准品、操作程序、操作

ü人：操作者

人员、环境等的组合

ü法：SOP

ü环：实验室

遗传病NGS检测流程

文库混合pooling目标区域捕获

检测前遗传咨询检测后遗传咨询

文库制备测序数据拆分

文库定量高通量测序

结果报告

数据信息分析

受检者知情同意核酸提取与检测

特定SNP一致QC结果核查

性

遗传分析

样本采集样本运输与接收

阳性位点验证

mNGS检测流程

NGS容易出现错误环节

•DNA提取效率不高

•实验过程发生污染

•文库接头没有有效连接

•设计的捕获探针不能有效捕获所有区域，对某些区域铺获效率低

•引物或探针特异性存在问题

•测序仪本身存在1-2%的错误率

•测序仪光路存在偏倚，导致测序碱基质量不高

•数据分析时参数设置不理想，导致过多的数据被过滤

•使用的软件出错

•加入的标签不能够准确识别

•检测人员操作能力等

为什么要做性能验证？

ß验证检测系统是否满足临床预期用途

ß验证的是检测系统，试剂盒或仪器只是其中的关键元素之一

基本概念

u验证（Verification）

通过提供客观证据对规定要求已得到满足的认定

（ISO15189：2012）

u确认（Validation）

通过提供客观证据对特定的预期用途或应用要求已得到满足的认定

（ISO15189：2012）

验证确认

验证(verification)