动物细胞的培养条件和培养基.ppt

第四节动物细胞的培养条件和培养基细胞体外培养基本条件:①无菌②营养充足,防止有害物质③氧气④随时清除代谢有害物质⑤良好的生存外环境⑥及时分种一、动物细胞的培养条件⒈器材的清洗和消毒⑴器材的清洗浸泡、刷洗、泡酸、冲洗⑵器材的消毒灭菌物理消毒化学消毒01.水质:电阻值大于18MΩ,去热原。02.pH:7.2～7.403.渗透压:290～300mOsm/kg04.温度:37±0.5C05.空气:氧的饱和质60%,氧分压4～0.7kPa01分3类:02天然培养基03合成培养基04无血清培养基二、动物细胞的培养基的种类和组成天然培养基血清、羊水、腹水等,成分复杂、成分不稳定合成培养基DME、MEM、DMEM、HAMF12、RPMI1640⑴氨基酸⑵维生素⑶糖类⑷无机盐⑸其它成分如：添加小牛血清添加小牛血清的作用⑴提供生长因子和激素⑵提供贴附因子和伸展因子⑶提供结合蛋白⑷提供必需脂肪酸和微量元素2017提高重复性012018减少微生物污染022019供应充足稳定032020产品易纯化042021避免血清因素对细胞的毒性052022减少血清中蛋白对生物测定的干扰06无血清培养基2生长因子和激素3结合蛋白1无血清培养基加入添加剂5有利细胞生长的因子和元素4贴附因子和伸展因子第五节动物细胞培养的基本方法01依细胞种类:原代培养、传代培养03依培养器和方式:05动物细胞大规模培养的方法：02依培养基:液体培养、固体培养04静止培养、旋转培养、搅拌培养、微载体培养、中空纤维培养、固定床或流化床培养06离心分离法消化分离法一细胞分离01020304自动细胞计数器计数血球计数板计数结晶紫染色细胞核计数法MTT染色计数法二细胞计数悬浮细胞传代贴壁细胞的传代0102三细胞传代四细胞的冻存和复苏1.细胞的冻存2.细胞的复苏第六节动物细胞大量培养的方法和操作方式动物细胞大规模培养的方法1生产实际分为：悬浮培养，贴壁培养，贴壁-悬浮培养2⑴微载体培养⑵包埋和微囊培养⑶结团培养⒈悬浮培养让细胞自由的悬浮于培养基内生长繁殖。⒉贴壁培养让细胞贴附在某种基质上生长繁殖的培养方法。⒊贴壁-悬浮培养分批式操作半连续式操作灌流式操作二、动物细胞培养的操作方式第七节动物细胞生物反应器及其检测控制系统01动物细胞生物反应器的类型及其基本结构02搅拌式生物反应器03气升式生物反应器04中空纤维式生物反应器05透析袋或膜式生物反应器06固定床或流化床式生物反应器⒈搅拌式生物反应器气升式生物反应器中空纤维式生物反应器固定床或流化床式生物反应器平床式中空纤维式生物反应器透析袋或膜式生物反应器CellGenplus生物反应器二、动物细胞生物反应器的

检测控制系统1培养过程需检测的物化参数3取样离线检测2直接在线检出4检测后计算5主要参数的检测和控制方法