注射用人脐带间充质干细胞种子库生产工艺的研究资料及验证资料（最全）(1).doc

申请分类：新药

注册分类：治疗用生物制品1类

药品名称注射用人脐带间充质干细胞

资料项目名称种子细胞生产工艺的研究资料及验证资料（5.0×107）资料项目编号

申请机构：

申请机构地址：申请机构电话：

申请机构主要研究者姓名：试验者姓名：

试验起止日期：

原始资料的保存地点：联系人姓名、电话：

药品注册申请人名称：

目录

缩略词对照表 1

1P2代种子细胞 1

2培养基的选择 1

2.1研究背景 1

2.2仪器设备 2

2.3实验方案 2

2.4培养基初步筛选的实验结果 3

2.5培养基筛选第二阶段实验结果（P0－P2） 5

2.5.1实验方案 5

2.5.2P1代细胞培养的实验结果 5

2.5.3P2代培养的实验结果 7

2.6培养基筛选第三阶段 9

2.7结果讨论 10

3冻存液的选择 11

3.1实验方案 12

3.2实验步骤 12

3.3复苏取样 12

3.4实验结果 13

3.5结论 13

4制备工艺路线的选择 13

4.1实验方案 14

4.1.1胶原酶消化法 14

4.1.2组织块贴壁法 15

4.2实验结果 16

5组织块贴壁法分离培养人脐带来源MSC 18

5.1技术路线图 18

5.2生产工艺描述 18

5.3生产过程主要工艺参数 21

5.4生产过程主要质控参数 22

6生产工艺的验证 24

6.1验证目的 24

6.2验证方案 24

6.3生产过程工艺参数验证 24

6.4生产过程质控参数验证 26

6.5实验结果 30

7生产过程的无菌控制 30

8参考文献 32

9附件 33

缩略词对照表

序号缩略词全称

1hUCMSCs人脐带间充质干细胞

2DMSO二甲亚枫

3HSA人血清白蛋白

4HES羟乙基淀粉

5SY-M-A培养基

6SY-E-A蛋白消化胰酶

7SY-PS-A保存液

新药治疗用生物制品3类9.种子细胞的生产工艺资料及研究资料第1页共34页

注射用人脐带间充质干细胞P2代种子细胞生产工艺研究资料及验证资料

本注册申报资料拟对注射用人脐带间充质干细胞P2代种子细胞的生产工艺和贮藏条件进行研究，优选出从脐带采集，分离，培养，冻存至P2代种子细胞的完整生产制备工艺方案，建立了一套从足月胎儿脐带分离传代培养至P2代种子细胞的标准生产工艺方案和质控方法，为注射用人脐带间充质干细胞成品提供质量可控的细胞来源。

1P2代种子细胞

本产品属于同种异体间充质干细胞，原料来源于足月胎儿脐带，经过分离，培养，接种，两次传代后得到P2代间充质干细胞，将P2代干细胞冻存在液氮中作为种子细胞备用。冻存前产品通过检测细胞形态，计数，活率等理化指标，细胞表面抗原分析鉴别，无菌，支原体等微生物检查，成骨成脂诱导分化潜能分析，原癌基因和抑癌基因检测，端粒酶活性分析，染色体核型检查等生物活性指标，确证为符合检定规程要求的注射用人脐带间充质干细胞P2代种子细胞。（具体内容参考本申报资料11）。

2培养基的选择

2.1研究背景

细胞培养是指模拟体内环境，使细胞在体外生长繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。常用的细胞培养体系包括细胞培养基，无菌无毒环境，恒定的温湿度等等。培养基的主要成份为氨基酸，碳水化合物，无机盐，维生素，血清，生长因子以