血脂脂蛋白及载脂蛋白测定一血脂标本的采集与检验质量控制二血清浆静置试验三血清浆总胆固醇测定四血清浆.ppt

（一）酶法

1.磷酸甘油氧化酶法（GPO-PAP法）原理用LPL使血清中TG水解成甘油和FFA，甘油在ATP和GK的作用下，生成3-磷酸甘油，再经GPO作用氧化生成磷酸二羟丙酮和H2O2，H2O2在POD作用下与4-AAP及4-氯酚（三者合称PAP）反应，生成红色醌类化物。分光光度计波长500nm测定吸光度，对照标准计算出TG含量原理500nm波长处测定吸光度，对照标准计算出TG含量消除游离甘油(FG)的干扰（1）外空白法：即同时采用不含LPL的酶试剂测定血清中FG作空白值，由于此法均需双份测定，使成本加倍，但也同时获得血清FG数值。（2）内空白法：（两步法或双试剂法）将酶试剂分作两部分，其中LPL和4-AAP组成试剂Ⅱ，其余部分为试剂Ⅰ。血清先加试剂Ⅰ，37℃孵育后，因无LPL存在，TG不被水解，FG在GK和GPO的作用下反应生成H2O2，但因不含4-AAP，不能完成显色反应，故可除去FG的干扰；再加入试剂Ⅱ，即可测出TG水解生成的甘油内空白法反应原理血清加试剂Ⅰ，37℃孵育，第一步反应如下：上述反应中，因无LPL，血清中TG不能水解，游离甘油（FG）在GK和GPO催化下生成H2O2，但因试剂不含4-AAP，不能完成Trinder显色反应(故可除去FG的干扰)。然后再加入试剂Ⅱ，TG即开始发生水解反应，最后生成红色苯醌亚胺，反应式同前。即通过血清分步反应除去FG的干扰。内空白法虽然增加了操作步骤，但不增加试剂成本，且排除FG干扰效果好，预孵育5min即可排除4mmol/LFG的干扰2.乳酸脱氢酶法本法的前两步与1法相同：利用NADH在340nm处吸光度的下降来测定甘油三酯的浓度

3.甘油氧化酶法该法直接测定甘油。分两步反应：（1）此步反应可以消除血清中游离甘油的干扰作用，其中EMAE是一种还原剂，其作用与酚相似，但灵敏度比酚高。一般第一步反应后3～5分钟后即可进行第二步反应（2）第二步反应包括：（二）变色酸显色法原理用二氯甲烷抽提血清TG，同时加入硅酸去除PL、FG、MG、部分DG及蛋白。TG经氢氧化钾皂化生成甘油，酸化后以过碘酸氧化甘油产生甲醛，用亚砷酸还原过剩的过碘酸后，甲醛与变色酸在硫酸溶液中加热产生紫红色反应，然后比色测定美国CDC将化学法(Van-Handel方法)修改后作为内部参考方法。此法抽提完全，去除了磷脂和甘油的干扰，以变色酸作显色剂，具有灵敏度高，呈色稳定等优点，但操作步骤多，不适合于日常工作中应用参考区间《中国成人血脂异常防治指南》(2016年修订版)提出的标准为:血清TG合适范围：≤1.7mmol/L边缘升高：1.7～2.3mmol/L升高：≥2.3mmol/L临床意义1.TG增高常见于家族性脂类代谢紊乱、肾病综合征、DM、甲减、急性胰腺炎、糖原积累病、胆道梗阻、原发性TG增高症、动脉粥样硬化等2.TG降低比较少见，慢性阻塞性肺疾患、脑梗死、甲亢、营养不良和消化吸收不良综合征等可引起血清TG的降低五、血清LP测定（一）血清脂蛋白电泳（二）HDL-C测定（三）LDL-C测定（四）Lp(a)测定（一）血清脂蛋白电泳血清脂蛋白电泳分析是利用电泳原理直接测定血浆脂蛋白的组成和相对含量，对高脂蛋白血症的分型具有十分重要的意义。电泳支持物可选用醋酸纤维素薄膜、琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶等，其中琼脂糖凝胶电泳最为常用脂蛋白电泳分析可分为预染法和电泳后染色法两大类预染法的操作比较简单，分离效果直观。其操作过程是先将待测血清和苏丹黑染料按一定比例混合进行预染处理，离心后取上清液进行电泳分析。其缺点是染液中残存的染料颗粒可停留在加样处，不易与乳糜微粒区分电泳后染色法为用电泳方法先将血浆脂蛋白各成份分开，再用苏丹黑进行染色临床上比较常用的是预染法电泳参考区间α-脂蛋白：0.30～0.40前β-脂蛋白：0.13～0.25β-脂蛋白：0.50～0.60乳糜微粒：阴性（二）HDL-C测定测定方法参考方法超速离心除去VLDL，然后用肝素-Mn沉淀LDL，上清液中的HDL-C用ALKB法测定目前临床实验室测定方法1.匀相测定法：常规方法2.化学沉淀法：如磷钨酸-Mg法、DS-Mg法和PEG6000法（曾作为常规方法）1.匀相测定法原理：（1）PEG修饰酶法(PEG法)1)CM、VLDL、LDL+α-环状葡聚糖硫酸盐+Mg2+→CM、VLDL、LDL和α-环状葡聚糖硫酸盐的可溶性聚合物2)HDL-C+PEG修饰的CEH和COD→胆甾烯酮+H2O23)H2O2+酚衍生物+4-AAP+POD→苯