细菌接种技术靖吉芳讲解.pptx

靖吉芳

待检标本的来源

培养目的

所使用培养基的性状

细菌接种方法

接种：将目标微生物转移至适于生长繁殖的人工培养基或活的生物体内的方法。

平板划线接种法

液体培养基的接种法

穿刺接种法

琼脂斜面接种法

倾注平皿法

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基本程序

一、平板划线接种法

适用于固体平板培养基接种，主要用于细菌分离培养和纯培养。通过划线接种的方法把含菌量多的临床标本接种到固体培养基表面并将其分散，经过18~24h培养后可得到单个菌落。

1.平板划线接种法

分离培养：原本混杂的细菌在固体平板表面分散开，从而培养出单个菌落的方法称为分离培养。

纯培养：挑取单个菌落转种至新的固体培养基培养得到更多的菌落。

❶连续划线法

❷分区划线法

1.平板划线接种法

适用于含菌量较少的标本或培养物。

将标本或培养物涂于平板边缘，由此开始用接种环做“Z”字形划线，并逐渐下移，直至划满平板表面。

❶连续划线法

1.平板划线接种法

适用含菌量较多的标本。四区划线步骤：

接种环醮取少量标本涂于平板表面一角以“Z”字形不重叠划线作为第一区，范围不超过平板1/5。

接种环灼烧灭菌并冷却，将平板旋转至合适位置，从1区通过3-5次在2区连续不重叠，划线完成后接种环灼烧灭菌。

同法划出3、4区。

❷分区划线法

1.平板划线接种法

1.平板划线接种法

平板分区划线法接种结果优劣的标准

严格遵循无菌操作并无污染菌。

达到分离目的，获得尽可能多的单个菌落。

分区明显，能充分利用培养基面积。

力度角度适宜，不划破琼脂。

线条密而不重叠（1区可除外），连接适合，不多交、少交、漏交及错交。

平板分区划线法接种结果优劣的标准

1区：标注学号、菌名

2区：划线前灼烧接种环灭菌

3区：划线前可灼烧或不灼烧接种环

4区：接种完毕灼烧接种环放置好

2.液体培养基接种法

适用于各种液体培养基：增菌、生化反应。

3.穿刺接种法

适用于半固体、高层斜面培养基的接种，主要用于细菌动力观察、某些生化特性检测。

方法：接种针挑取菌落自培养基正中垂直刺入至距管底约0.4cm处，然后原路抽出。

3.穿刺接种法

4.斜面接种

目的：用于纯培养和保存细菌。通常是从琼脂平板上挑单个菌落做纯培养。

步骤一：

右手持接种环（针），灼烧冷却后挑取目的菌。

左手持斜面培养基，管口通过火焰灭菌。

接种工具伸入斜面管内，先从斜面底部到顶端划一直线，沿着直线自下而上曲线划线。

5.琼脂斜面接种

6.倾注平板法

用于尿液标本、饮水、药物等标本的细菌数量测定（标本稀释后取1ml注入无菌培养皿，再加入冷却至50℃左右的琼脂培养基混匀培养，菌落计数）。

7.涂布接种法

常用于纸片发药物敏感实验，也可用于被检标本中的细菌计数。

取少量菌夜滴加到培养基表面。

将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8~10s。

用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。

细菌接种技术

平板划线法：分区划线法—含菌量多标本；连续划线法—含菌量少标本。

斜面接种法：纯种增菌、保存菌种。

穿刺接种法：动力试验（半固体）、高层琼脂。

液体接种法：增菌与生化管。

倾注平板法：定量培养、菌落计数。

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