【药学课件】生物技术制药.ppt

;第一节概述;第一节概述;〔1〕抗体与免疫球蛋白;〔2〕多克隆抗体与单克隆抗体;;单克隆抗体的应用：;单克隆抗体用于临床治疗，CD3单克隆抗体作为免疫抑制剂对器官移植免疫排斥有抑制作用。

以单克隆抗体作为载体的药物对肿瘤进行定向治疗。;免疫导向疗法的障碍与改造;第二节单克隆抗体;;第二节单克隆抗体——抗原与动物免疫;2、抗原的制备与纯化

多数抗原物为混合物，须经免疫、筛选、克隆化。

3、免疫动物品系与骨髓瘤细胞品系

骨髓瘤细胞来源：BALB/c小鼠、Lou大鼠;骨髓瘤细胞系

全名简称来源耐受表达自身Ig分子

p3-X63-Ag8X63BALB/c8-AgIg-r1.κ

MOPC11-X45-6TGX45BALB/c6-TGIg-r2b

p3-NS1-Ag4.1NS-1BALB/c8-Agκ〔非分泌型〕

p3-X63-Ag8.653P3.653BALB/c8-Ag——

SP2/0-Ag14SP2/0BALB/c8-Ag——

Fast-ZeroFOBLAB/c8-Ag——

Y3-Ag1,2,3Y3Lou8-Agκ链

YB2-3.0-Ag20YB2(LouAO)F18-Ag——;免疫方法：体内、体外;2、体外免疫：不能用体内方法或抗原免

疫原性极弱且引起免疫抑制时。

抗原量少〔＜10μg〕、免疫期短〔4-5d〕、干扰因素少、杂交瘤细胞株不稳定。

4-8WBALB/c小鼠脾脏制成细胞悬液，加Ag达0.5-5μg/ml，培养4-5d〔370C、5%CO2〕，别离脾细胞，细胞融合。;淋巴细胞

〔致敏动物脾细胞〕;第二节单克隆抗体

——细胞融合与杂交瘤细胞的选择培养;脾——脾;;第二节单克隆抗体

——筛选阳性克隆与克隆化;第二节单克隆抗体

——杂交瘤细胞与抗体性状的鉴定;第二节单克隆抗体

——McAb的大量制备;;第二节单克隆抗体——McAb的纯化;第二节单克隆抗体——McAb的纯化;2、别离

凝胶过滤：SephadexG200为介质，最顶峰IgM，另两峰IgG，收率50-80%，纯度90%以上。

阴离子交换：IgG类，pH5.5除杂蛋白，pH7.4时IgG1、IgG2结合于层析柱，低离子强度IgG2a洗脱，IgG2b、IgG3沉淀。

亲和层析：IgG类，pH8.0〔IgG2b、IgG3结合在蛋白A柱，IgG1稍差〕，pH3.5洗脱IgG2b，pH4.0洗脱IgG3，pH4.5洗脱IgG2a，pH6.0洗脱IgG1。;总之，应依据单抗IgG类和亚类不同，选各种不同的纯化方法。体内诱生法单克???抗体的纯化方法：

1、离心〔取上清〕、超滤、盐析

2、别离

⑴凝胶过滤〔IgG、IgM单抗纯化〕

⑵阴离子交换层析〔IgG单抗纯化〕

⑶亲和层析〔IgG单抗纯化〕;第三节鼠源性单克隆抗体的改造;类型根本结构相对分子量

人-鼠嵌合抗体人IgC-小鼠IgV150000

改形抗体小鼠CDRs替换人CDRs150000

Fab完整L链和Fd50000

FVVH和VL25000

单链抗体〔SCFV〕VH-多肽-VL27000

单域抗体VH或VL12500

最小识别单位〔MRU〕一个CDR＜2000;;一、人-鼠嵌合抗体

抗原抗体结合功能—抗体可变区〔V〕

同种性免疫源性—抗体稳定区〔C〕

在基因水平上将鼠源单抗的H和L链可变区基因别离出来，分别与人Ig的H和L链的稳定区〔C〕基因连接成人-鼠嵌合抗体的H和L链基因，再共转染骨髓瘤细胞，就能表达完整人-鼠嵌合抗体。;二、改形抗体〔CDR移植抗体〕

Ig分