《试验用大肠杆菌研究》课件.ppt

*******************试验用大肠杆菌研究本课件将深入探讨试验用大肠杆菌，涵盖其特性、培养、遗传操作、应用及相关问题。内容丰富，实用性强，旨在为研究者提供全面参考。by大肠杆菌的一般特性形态短杆状，无鞭毛，无芽孢，革兰氏阴性。大小长度约2-3微米，宽度约0.5-1微米。生长温度最佳生长温度为37°C，可在10-45°C生长。大肠杆菌的分类界细菌界门变形菌门纲γ-变形菌纲目肠杆菌目大肠杆菌的生理特性呼吸类型兼性厌氧，可在有氧或无氧条件下生长。营养需求营养要求简单，可利用多种碳源和氮源。生长速度生长速度快，在适宜条件下可每20分钟繁殖一次。大肠杆菌的代谢过程1糖酵解将葡萄糖分解为丙酮酸，产生ATP。2三羧酸循环丙酮酸进一步氧化，产生能量和还原性辅酶。3电子传递链还原性辅酶传递电子，产生ATP和水。大肠杆菌的培养基要求营养成分提供大肠杆菌生长所需的碳源、氮源、无机盐、维生素等。pH值大肠杆菌最佳生长pH值为6.5-7.5。温度最佳生长温度为37°C。大肠杆菌的常见培养基类型液体培养基用于大量培养大肠杆菌。固体培养基用于分离和计数大肠杆菌。斜面培养基用于保存大肠杆菌菌种。大肠杆菌的分离方法稀释平板法将样品进行连续稀释，然后接种到平板培养基上。划线分离法用接种环将样品划线接种到平板培养基上。选择培养法利用大肠杆菌的特殊营养需求或生长特性进行分离。大肠杆菌的染色鉴定1革兰氏染色鉴别大肠杆菌的革兰氏阴性特征。2荚膜染色观察大肠杆菌是否有荚膜。3鞭毛染色观察大肠杆菌是否有鞭毛。大肠杆菌的生长曲线1延滞期细菌适应新环境，准备繁殖。2对数期细菌以指数速度繁殖。3稳定期细菌生长速度减缓，繁殖与死亡平衡。4衰亡期细菌死亡速度大于繁殖速度。大肠杆菌的遗传特性1染色体环状DNA，包含约460万个碱基对。100质粒环状DNA，可独立于染色体复制。1K转座子可移动的DNA片段，可在基因组内移动。大肠杆菌实验操作注意事项安全防护佩戴手套、口罩、眼镜等，防止感染。无菌操作使用灭菌设备，防止污染。培养基配制严格按照配方配制，确保营养充足。大肠杆菌基因的载体克隆载体选择选择合适的质粒载体，如pUC19，pBR322。基因插入将目标基因插入载体的多克隆位点。转化将重组质粒导入大肠杆菌。大肠杆菌基因表达系统1启动子控制基因表达的起始。2核糖体结合位点指导核糖体结合，起始蛋白质合成。3终止密码子终止蛋白质合成。大肠杆菌质粒编码基因的鉴定1限制性酶切分析利用限制性内切酶识别并切割DNA，确定基因片段大小。2聚合酶链反应(PCR)扩增目标基因，验证其是否存在。3DNA测序确定基因序列，验证基因是否正确插入。大肠杆菌蛋白的纯化工艺细胞破碎破坏细胞，释放蛋白质。离心分离去除细胞碎片和杂质。层析分离利用蛋白质的物理化学性质进行分离。纯度鉴定验证蛋白质的纯度，确保目标蛋白的纯度。大肠杆菌蛋白质的免疫学检测抗体产生利用蛋白质作为抗原，免疫动物，获得针对该蛋白质的抗体。抗体检测使用抗体与蛋白质进行特异性反应，检测蛋白质的存在和丰度。ELISA酶联免疫吸附试验，是常用的免疫学检测方法。大肠杆菌蛋白质的生物活性评价酶活性测定对于具有酶活性的蛋白质，通过测定其催化反应的速度来评价活性。细胞培养实验观察蛋白质对细胞生长的影响，评价其生物活性。动物实验在动物模型上进行实验，评价蛋白质的生物活性。大肠杆菌基因工程在医疗中的应用药物生产生产胰岛素、生长激素等药物。疫苗研制研制新型疫苗，如乙肝疫苗。诊断试剂生产用于疾病诊断的试剂。大肠杆菌基因工程在农业中的应用抗虫作物转入抗虫基因，提高作物抗虫能力。抗除草剂作物转入抗除草剂基因，提高作物抗除草剂能力。营养改良作物转入营养改良基因，提高作物营养价值。大肠杆菌基因工程在环境保护中的应用1污染物降解利用大肠杆菌降解污染物，如重金属和有机污染物。2生物传感器开发用于检测环境污染物的生物传感器。3生物修复利用大肠杆菌修复受污染的土壤和水体。大肠杆菌基因工程在工业生产中的应用1酶生产生产各种工业用酶，如淀粉酶和蛋白酶。2生物材料生产生物降解材料，如生物塑料。3生物燃料生产生物燃料，如生物柴油。大肠杆菌基因工程的安全性问题1基因逃逸转基因大肠杆菌可能逃逸到环境中，造成生物安全问题。2抗生素耐药性转