检验诊断试剂免疫.ppt

第30页,共55页，星期六，2024年，5月第31页,共55页，星期六，2024年，5月第32页,共55页，星期六，2024年，5月第33页,共55页，星期六，2024年，5月第34页,共55页，星期六，2024年，5月第35页,共55页，星期六，2024年，5月第36页,共55页，星期六，2024年，5月第37页,共55页，星期六，2024年，5月第38页,共55页，星期六，2024年，5月第39页,共55页，星期六，2024年，5月第40页,共55页，星期六，2024年，5月第41页,共55页，星期六，2024年，5月第42页,共55页，星期六，2024年，5月第43页,共55页，星期六，2024年，5月第44页,共55页，星期六，2024年，5月第45页,共55页，星期六，2024年，5月第46页,共55页，星期六，2024年，5月第47页,共55页，星期六，2024年，5月第48页,共55页，星期六，2024年，5月第49页,共55页，星期六，2024年，5月第50页,共55页，星期六，2024年，5月第51页,共55页，星期六，2024年，5月1.概述：以硝酸纤维素膜为载体，利用微孔滤膜的可滤过性，使抗原抗体反应和洗涤在一特殊的渗滤装置上以液体渗滤过膜的方式迅速完成。（斑点免疫渗滤试验最初是从斑点ELISA基础上发展起来建立的，应用的结合物是酶标记的，称为斑点酶免疫渗滤试验。90年代初发展了以胶体金为标记物的斑点免疫渗滤试验（DIGFA），又名滴金免疫测定法（简称滴金法）。在滴金法中不需酶对底物的反应，更加简便、快速，在临床检验中应用日渐广泛。）斑点免疫渗滤试验2.原理：以双抗体夹心法为例。在硝酸纤维素膜的膜片中央滴加纯化的抗体，为膜所吸附。当滴加在膜上的标本液体渗滤过膜时，标本中含抗原被膜上抗体捕获，其余无关蛋白等没滤出膜片。其后加入的胶体金标记也在渗滤中与已结合在膜上的抗原相结合。因胶体金本身呈红色，阳性反应即在膜中央显示红色斑点。3.试剂和操作渗滤装置是滴金法测定中的主要试剂成分之一，由塑料小盒、吸水垫料和点加了抗原或抗体的硝酸纤维素膜片三部分组成塑料小盒可以是多种形状的，盒盖的中央有一直径约0.4～0.8cm的小圆孔，盒内垫放吸水垫料，硝酸纤维素膜片安放在正对盒盖的中央有一直径约0.40.8cm的小圆孔，盒的垫放吸水塑料，硝酸纤维素膜片安放在正对盒的圆孔下，紧密关闭盒盖，使硝酸纤维素膜片贴紧吸水垫料。如此即制备成一渗滤装置（图19-1）。塑料小盒的形状最多见的是扁平的长方形小板，加之滴金法的整个反应过程都是在渗滤装置上进行的，因此又常称渗滤装置为滴金法反应板。第52页,共55页，星期六，2024年，5月?????????????????????????????????????????????图19-1DIGFA渗滤装置及操作示意图A：操作示意图B:装置分解图斑点免疫渗滤试验第53页,共55页，星期六，2024年，5月斑点免疫层析试验1.原理：斑点免疫层析试验（DICA）简称免疫层析试验（ICA），也以硝酸纤维素膜为载体，但利用了微孔膜的毛细血管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移，犹如层析一般2.试剂和操作免疫层析试验以单克隆双抗体夹心法为例。试验所用试剂全部为干试剂，多个试剂被组合在一个约6mm×70mm的塑料板条上，成为一单一试剂条（图19-2），试剂条上端（A）和下端（B）分别粘贴吸水材料，免疫金复合物干片粘贴在近下端（C）处，紧贴其上为硝酸纤维素膜条。硝酸纤维素膜条上有两个反应区域，测试区（T）包被有特异抗体，参照区（R）包被有抗小鼠IgG。第54页,共55页，星期六，2024年，5月免疫金银染色1.原理：金免疫技术测定的产物上的金颗粒可将银离子还原成银颗粒，在金颗粒表面形成一色泽更深的黑色层，因而增强了金免疫技术的敏感性（图19-3）。（IGSS）第55页,共55页，星期六，2024年，5月**********固相酶免疫测定ELISA(酶联免疫吸附试验)第2页,共55页，星期六，2024年，5月酶标志物、抗原、抗体、酶免疫复合物第3页,共55页，星期六，2024年，5月酶标志物——酶标记抗体或抗原酶免疫技术的核心组成部分酶结合物（conjugate）酶标记物通过化学反应或免疫学反应，让酶与抗体或抗原形成的结合物第4页,共55页，星期六，2024年，5月酶标记抗体或抗原制备方法过碘酸钠法（直接法）常用于HRP标记抗体或抗原戊二醛交联法第5页,共55页，星期六，2024年，5月1.辣根过氧化物酶（HRP）糖