检验仪器汇总说明.ppt

2、间接法测抗体间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相抗原结合的受检抗体，故称为间接法。操作步骤如下：(1)将特异性抗原与固相载体联结，形成固相抗原。洗涤除去未结合的抗原及杂质。第72页,共82页，星期六，2024年，5月(2)加稀释的受检血清。血清中的特异性抗体与固相抗原结合，形成固相抗原抗体复合物，经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体。其他免疫球蛋白及血清中的杂质由于不能与固相抗原结合，在洗涤过程中被洗去。(3)加酶标抗免疫球蛋白（酶标抗抗体，一般为酶标抗人IgG)。它与固相复合物中的抗体相结合，从而使该抗体间接地标记上酶。清洗后，固相载体上的酶量与特异性抗体的量相关。第73页,共82页，星期六，2024年，5月(4)加底物显色。颜色深度与标本中受检抗体量相关。本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断。本法的主要缺点为受检标本须经稀释（1:50-1:20）的后才能进行测定，否则血清中高浓度的非特异性IgG和其他干扰物质会引起阴性本底过高，影响结果的判断。第74页,共82页，星期六，2024年，5月3、双抗原夹心法反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。同属抗体检测，与间接法不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。在间接法不适用时（例如包被抗原中的杂质可与酶标记的抗入IgG反应），可试用此法。此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因此其敏感度相对高于间接法。在临床检验中，抗HBs的ELISA常采用本法。第75页,共82页，星期六，2024年，5月4、竞争法测抗体当相应抗原材料中含有与抗入IgG反应的物质，而且不易得到足够的纯化抗原进行包被时，可用此法检测特异性抗体．其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体量愈多，结合在固相上的酶标抗体愈少。因此阳性反应呈色较浅于阴性反应。由于抗原的难得，在包被时多采用捕获法，即先包被与抗原相应的抗体，然后加入抗原，形成固相抗原。第76页,共82页，星期六，2024年，5月5、竞争法测抗原小分子抗原和半抗原因缺乏可作夹心的二个或二个以上的位点，因此不能用双抗体夹心法进行测定。竞争法的原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合。标本中抗原量愈多，结合在固相上的酶标抗原愈少。因此标本中抗原含量较多的，反应呈色较含量少的为淡。小分子激素，药物等的ELISA测定多用此法。第77页,共82页，星期六，2024年，5月免疫荧光标记技术第78页,共82页，星期六，2024年，5月一、免疫荧光技术基本原理免疫荧光技术的原理是利用物质吸收光能后，产生激发态而发光的特性。将具有这种特性的荧光素（异硫氰荧光黄或罗丹明B200)用化学方法结合在特异的抗体或抗原上，又不损害其抗体或抗原活性的一种荧光显微镜下的示踪技术。抗体与抗原的结合是高度特异的，所以只要知道其中的一种因子，也就知道了另一种因子。第79页,共82页，星期六，2024年，5月免疫荧光技术就是利用上述两种特性，把不可见的抗原抗体的反应（一抗）与被荧光素标记的抗体（抗抗体）反应，变为肉眼可见的荧光，在荧光显微镜下我们所能见到的亮绿荧光，不是标本本身发出的，而是荧光物质受到激发后而发出的亮绿色荧光。一、免疫荧光技术基本原理第80页,共82页，星期六，2024年，5月荧光偏振免疫分析(FPIA)原理用荧光素标记的示踪物与分析物的复合体经单一平面偏振光的激发照射后，可发出单一平面的偏振荧光，此荧光在特定偏振面的强度与复合体受激发时的转动速度成反比，而复合体的转动速度又与分子量的大小成反比。分子越小，旋转速度越快，则荧光偏振程度越小。第81页,共82页，星期六，2024年，5月用三价稀土离子(Eu3+)作为标记物，标记抗原或抗体，用时间分辨技术（使用长效荧光标记物，在关闭激发光后再测定荧光强度的分析方法）测量荧光强度，根据荧光强度或相对荧光强度比值，来判断反应体系被分析物的浓度。由于同时利用波长和时间两种分辨，该法极其有效地排除了非特异荧光，大大地提高了分析灵敏度。时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)

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第82页,共82页，星期六，2024年，5月定性分析近红外光谱定性分析利用模式识别与聚类的一些算法，主要用于鉴定。在模式识别运算时需要有一组用于计算机“学习”的样品集，通过计算机运算，得出学习样品在数学空间的范围，对未知样品运算后，若也在此范围内，则该样品属于学习样品集类型，反之则否定。聚类运算时不需学习样品集，它通过待分析样品的光谱特征，根据光谱近似程度进行分