《电泳基本理论》课件.pptVIP

**********************电泳基本理论电泳技术简介分离技术电泳是一种基于电场中带电粒子的迁移速度差异来分离物质的技术。应用广泛广泛应用于生物化学、分子生物学、医学诊断、食品安全、环境监测等领域。核心原理利用带电粒子在电场中迁移速度的不同来分离混合物中的不同成分。电泳技术的发展历程1早期19世纪末，首次发现电泳现象220世纪30年代Tiselius发明了第一台电泳仪320世纪50年代琼脂糖凝胶电泳技术问世420世纪70年代SDS技术应用于蛋白质分析521世纪高通量电泳技术和自动化分析系统电泳技术的基本原理带电粒子基于带电粒子的迁移电场力电场力的作用分离效果根据电荷和大小分离电泳技术的主要组成部分电泳仪电泳仪是电泳系统的核心部件，它提供稳定的直流电源，以驱动电泳过程。电泳槽电泳槽是放置样品和缓冲液的容器，它通常由耐腐蚀的塑料或玻璃材料制成。电极电极是连接电源和电泳槽的导体，它们通常由铂或碳制成。电极的原理和功能正极吸引带负电荷的物质，例如蛋白质中的阴离子。负极吸引带正电荷的物质，例如蛋白质中的阳离子。电流驱动带电粒子在电场中迁移，实现物质分离。电源装置的作用及要求1提供电场电源装置是电泳的关键部件之一，它负责提供稳定的直流电，形成电场，推动带电粒子在电泳介质中移动。2电压和电流稳定电源装置需要提供稳定的电压和电流，以确保电泳分离的可靠性和重复性。3安全保护电源装置应具有过载、短路和过压保护功能，以确保操作人员和设备的安全。缓冲液的配制选择合适的缓冲体系根据电泳实验的要求选择合适的缓冲体系，例如Tris-甘氨酸缓冲体系适用于蛋白质电泳，而硼酸缓冲体系适用于核酸电泳。精确称量缓冲液成分按照配方准确称量所需缓冲液成分，并溶解于蒸馏水中。调整缓冲液pH值用稀盐酸或氢氧化钠溶液调节缓冲液的pH值至目标值，并用pH计进行校正。过滤除菌将配制好的缓冲液过滤除菌，以防止微生物污染。样品处理的注意事项样品准备样品处理的步骤可能会有所不同，但一般来说需要对样品进行预处理，例如过滤、浓缩、沉淀等。样品储存在电泳之前，应将样品妥善保存，以防止样品变质或降解。样品标记所有样品应进行清晰的标记，包括样品名称、日期和实验编号等。电泳仪器的基本结构电泳仪器主要由电源装置、电泳槽、冷却系统和检测系统组成。电源装置提供高压直流电，电泳槽是进行电泳分离的场所，冷却系统可以控制电泳槽的温度，检测系统用来检测电泳过程。水平电泳的操作流程1准备工作准备电泳仪器、缓冲液、样品和凝胶板等。2制胶将凝胶板固定在电泳槽中，倒入凝胶溶液，待其凝固。3加样将样品小心地加入凝胶板的样品孔中。4电泳连接电源，开始电泳，并根据需要调整电压和电流。5染色电泳结束后，用染色液染色凝胶，以便观察电泳结果。6脱色用脱色液脱去背景染色，使电泳结果更清晰。7观察结果观察电泳结果，记录并分析实验数据。垂直电泳的操作流程1准备工作2样品制备3电泳分离4染色与脱色5结果分析等电聚焦电泳的原理原理等电聚焦电泳是一种分离蛋白质的电泳技术，它利用蛋白质的等电点（pI）不同来进行分离。步骤首先，将蛋白质样品加载到含有pH梯度的凝胶上，然后通电。蛋白质会迁移到其等电点的位置，在那里它们不再带电荷，并形成一个聚焦带。蛋白质分子量检测方法原理SDS通过蛋白质在SDS存在下，按照分子量大小进行分离。凝胶过滤色谱通过不同分子量的蛋白质在凝胶柱中的迁移速度不同进行分离。DNA分子量检测1凝胶电泳根据DNA片段大小分离2标准曲线使用已知大小的DNA片段创建标准曲线3分子量计算根据未知DNA片段的迁移距离，从标准曲线推算分子量基因扩增产物的检测灵敏度特异性核酸与蛋白质分离分析核酸分离电泳技术可用于分离不同长度的核酸分子，例如DNA或RNA。蛋白质分离电泳技术可用于分离不同大小和电荷的蛋白质分子，例如酶或抗体。电泳图谱的分析与解读条带位置观察条带在凝胶上的位置，确定目标物质的迁移率，并根据已知标准品进行比对。条带数量分析条带的数量，判断样品中是否含有多种目标物质，以及其相对含量。条带大小通过条带的宽度和强度，可以推断目标物质的分子量和浓度，并进行定量分析。实验数据的记录与整理1准确记录实验过程中需要准确记录实验条件、操作步骤和观察结果。2规范整理实验数据需要规范整理，便于分析和比较。3数据备份做好数据备份，防止数据丢失。实验结果的分析与讨论数据解读仔细观察电泳图谱