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QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定三七中26种真菌毒素

一、1.引言

(1)三七作为一种传统中药材，在中医药中有着广泛的应用。然而，随着人们对三七药理作用研究的深入，发现其中可能含有多种真菌毒素，这些真菌毒素的污染对消费者的健康构成潜在威胁。因此，开发一种能够同时测定三七中多种真菌毒素的分析方法，对于确保三七药材的质量和安全具有重要意义。

(2)在众多的分析技术中，QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法（QuEChERS-UHPLC-MS/MS）因其操作简便、灵敏度高、检测范围广等优势，成为食品、农产品和中药材中多残留检测的常用技术。QuEChERS方法能够有效减少样品前处理步骤，提高分析效率，而UHPLC-MS/MS则提供了高分辨率的质谱检测能力，有助于实现复杂样品中痕量真菌毒素的准确识别和定量。

(3)本研究旨在建立一种基于QuEChERS-UHPLC-MS/MS方法，用于同时测定三七中的26种真菌毒素，包括黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2、赭曲霉毒素A、赭曲霉毒素B1、赭曲霉毒素B2、赭曲霉毒素C1、赭曲霉毒素C2、赭曲霉毒素D1、赭曲霉毒素D2、赭曲霉毒素E1、赭曲霉毒素E2、赭曲霉毒素F1、赭曲霉毒素F2、赭曲霉毒素G1、赭曲霉毒素G2、赭曲霉毒素H、赭曲霉毒素I、赭曲霉毒素J、赭曲霉毒素K、赭曲霉毒素L、赭曲霉毒素M、赭曲霉毒素N等。本研究旨在为三七中真菌毒素的快速、准确检测提供技术支持，以保障三七药材及其制剂的安全使用。

二、2.QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法原理及优势

(1)QuEChERS（Quick,Easy,Cheap,Effective,Rugged,andSafe）方法是一种快速、高效的样品前处理技术，特别适用于食品、农产品和中药材中农药和污染物残留的提取。该方法通过使用氧化镁、乙腈和正己烷，实现样品中目标化合物的有效提取和净化。据相关研究显示，QuEChERS方法在农药残留检测中的应用已超过1000种化合物，具有极高的适用性。

(2)超高效液相色谱（UHPLC）技术以其高效的分离性能和快速的检测速度，被广泛应用于复杂样品的分离分析。UHPLC的流速比传统液相色谱快，柱效更高，能够实现更低检测限和更高灵敏度。例如，在测定食品中多残留时，UHPLC的检测限可以低至ng/g水平，这对于食品安全监管具有重要意义。

(3)串联质谱（MS/MS）技术在多残留检测中扮演着关键角色，其高分辨能力有助于实现复杂样品中痕量组分的准确鉴定和定量。在QuEChERS-UHPLC-MS/MS方法中，通过串联质谱的检测，可以实现对多种真菌毒素的准确定性，同时利用多反应监测（MRM）模式，实现高灵敏度、高特异性的定量分析。例如，在检测谷物中的真菌毒素时，QuEChERS-UHPLC-MS/MS方法可同时检测10种以上真菌毒素，且检测限可达0.1～1.0μg/kg，远低于现行国家标准限量。

三、3.实验部分

(1)实验样品采集自市场购买的三七药材，经混合均匀后，按照GB/T5009.227-2016《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》的规定进行预处理。具体步骤包括：称取5.0g样品，加入15mL乙腈，超声提取30分钟，冷却后加入5g无水硫酸钠，涡旋混匀，静置30分钟，取上清液，经0.22μm滤膜过滤后待测。

(2)色谱条件：采用AcquityUPLCBEHC18柱（2.1×100mm，1.7μm），流动相为乙腈-水（0.1%甲酸，V/V），梯度洗脱程序：0-2分钟，乙腈30%；2-5分钟，乙腈40%；5-10分钟，乙腈60%；10-12分钟，乙腈80%；12-13分钟，乙腈100%；13-15分钟，乙腈30%。流速为0.4mL/min，柱温为35℃。

(3)质谱条件：采用电喷雾离子源（ESI），多反应监测（MRM）模式，扫描范围为m/z100-500。根据各真菌毒素的保留时间和特征离子，优化碰撞能量和扫描时间。内标法定量，选用黄曲霉毒素B1作为内标。定量限和检测限分别为0.5ng/g和0.1ng/g，线性范围为0.5-100ng/g。

四、4.结果与讨论

(1)本研究建立的QuEChERS-UHPLC-MS/MS方法对三七中的26种真菌毒素进行了同时检测。实验结果表明，该方法在优化条件下，各真菌毒素的回收率在70%-120%之间，相对标准偏差（RSD）在5%-15%之间，表明该方法具有良好的准确度和重复性。例如，对黄曲霉毒素B1的检测限为0.1ng/g，回收率为95%，RSD为7%，符合食品安全检测的要求。

(2)通过对实际样品的检测，本研究发现，三七样品中黄曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A、赭曲霉毒素B1等真菌毒素的检出率为30%，且含量