灭活剂和佐剂.pptVIP

灭活剂和佐剂;第一节灭活剂;〔一〕什么是灭活？;生物制品意义上灭活的含义：是利用物理或化学的方法，破坏微生物的生物学活性，破坏病原微生物的繁殖能力和致病能力，但仍然保存反响原性和免疫原性的过程。;〔二〕灭活的类型;1、物理灭活;2、化学灭活;〔三〕灭活剂;

是最古典、使用最广泛的灭活剂

《兽医生物制品制造及检验规程》〔2000〕中的26种灭活疫苗，均以甲醛作为灭火剂。;甲醛的水溶液——福尔马林(含甲醛36~40%)

灭活机理：复原作用;灭活浓度：需氧细菌0.1％～0.2％，厌氧细菌0.4％～0.5％，病毒0.05％～0.4％。

灭活原那么：低浓度、短时间而又能到达彻底灭活目的。

必要时可在灭活后参加焦亚硫酸钠，以中断其反响。;N-乙酰乙烯亚胺〔AEI)、二乙烯亚胺(BEI)、缩水甘油醛〔GDA〕

灭活机制：

1.烷化DNA分子中的鸟嘌呤或腺嘌呤等，引起单链断裂或双螺旋链交联，因改变DNA的结构而破坏其功能，阻碍RNA的合成，从而抑制细胞的有丝分裂。

2.与酶系统和核蛋白起作用而干扰核酸代谢。;优点：能破坏病毒的核酸芯髓，使病毒完全丧失感染力，而不损害其蛋白衣壳，保存其保护性抗原。;〔1〕N-乙酰乙烯亚胺〔AEI〕

淡黄色澄明液体，有轻微氨臭味，能与水或醇任意混合。

0～4℃可保存1年，在-20℃可保存2年。

AEI功能基团是乙烯亚胺基，可用于口蹄疫灭活苗。

口蹄疫病毒液:终浓度0.05％，30℃8h,加2％硫代硫酸钠阻断

;〔2〕二乙烯亚胺〔BEI〕

市购商品为0.2％的BEI溶液，在0～4℃可保存1个月;

口蹄疫病毒悬液：终浓度0.02%,参加2％硫代硫酸钠中断灭活。;大肠杆菌、噬菌体、新城疫病毒灭活效果优于甲醛。

本品易挥发，水溶液含量为15～31mg/ml。

0～4℃保存3个月后含量渐下降，约半年失效；20℃只能保存10d。

;3.苯酚;4.结晶紫;5.β-丙内酯;6.硫柳汞;1、灭活剂特异性：如石炭酸对真菌和病毒效果差，但对细菌效果好。结晶紫能杀死多种革兰氏阳性菌和阴性菌，但对绿脓杆菌和细胞芽孢作用弱。

2、微生物种类和特性：;3、灭活剂浓度〔一定要适合〕

4、灭活温度：通常同一浓度的灭活剂在不同温度的灭活速度与温度成正比，??温度太高，对微生物的抗原性将有不利影响。〔具体不同病原体或毒素，其灭活时间和温度不一致〕。;5、灭活时间：一般采用低浓度、低温和短时间处理为最正确。

6、灭活pH值：

7、微生物含氮量：一般微生物或毒素的总氮量和氨基氮含量越高，灭活剂的消耗量就越大、灭活脱毒越慢。

8、有机物存在：;第二节佐剂;

佐剂是免疫学和生物制品学中的一个重要内容;

什么是“佐剂”呢？;1.佐剂〔新概念〕：但凡可以增强抗原特异性免疫应答的物质均称为佐剂。

佐剂〔旧概念〕：当一种物质先于抗原或与抗原混合或同时注射于动物体内，能非特异性地改变或增强机体对该抗原的特异性免疫应答,发挥其辅佐作用的物质。

也称免疫佐剂、抗原佐剂。

注意:佐剂和免疫增强剂的关系?;①明显增强抗原性微弱的物质诱导机体产生特异性免疫应答。

②用最少的抗原和最少的接种次数，产生足够的免疫应答。;二、研究历史;2、1950年代;3、1960年代以后;4、我国的佐剂的研究;

WHO认为佐剂除具有免疫增强效应外，尚必须具备以下标准，否那么不得用作佐剂。;1、无致癌或辅助致癌性;4、应有一定的吸附力

最好吸附力强;7、不应诱发自身超敏性

也不应与抗体结合形成有害的免疫复合物。;四、免疫佐剂作用机理;①抗原递呈〔antigenpresentation〕

②抗原寻的〔antigentargeting〕

③免疫调节〔immunemodulation〕

;①抗原递呈：指抗原分子递呈给T细胞的方法。佐剂与疫苗联合使用，有助于抗原性物质在胞内被加工，被MHC分子特异性的结合、保护、运输并递呈给效应细胞。;②抗原寻的〔antigentargeting〕

指抗原传递给免疫系统中适当效应细胞的效率。包括吸引巨噬细胞到达组织部位、活化吞噬细胞、促进抗原与细胞受体的结合等。;③免疫调节〔immunemodulation〕

是指任何可以修饰的免疫效应细胞对抗原或表位进行加工的机制。通过这种机制，可以改变特异性免疫应答的本质或强度。T细胞有Th1和Th2两个亚类。同一抗原和不同佐剂一起使用能够引起不同的免疫反响。因此，通过筛选特定的佐剂，可以到达诱导正确的免疫应答的目的。;1.按佐剂物理性质

颗粒型佐剂

非颗粒型佐剂

2.按佐剂的生物