第六章药物安全性检查62讲解.ppt

第六章药物安全性检查三、微生物限度检查法指检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染的程度的方法。检查项目包括：需氧菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。控制菌检查指大肠埃希菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌及铜绿假单胞菌的检查。1、洁净度要求：环境洁净度1万级下局部100级的单向流空气区域内（C级环境下的局部A级）。2、培养温度：需氧菌：30~35℃霉菌、酵母菌：23~28℃控制菌：30~35℃3、检查结果：以1g、1ml、10g、10ml或10cm2为单位报告4、检验量：一次试验所用的供试品量（g、ml或cm2）例：片剂：一般检验量为10g，从2个以上最小包装单位中抽取，一次抽取量不少于检验量的3倍量。5、供试品的制备片剂：取供试品10g，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,混匀，作为1:10的供试液，再用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液稀释成1:100，1:1000等稀释液。6、检查法平皿法：取供试液1ml，置直径90mm的无菌平皿中，注入15~20ml温度不超过45℃的溶化的胰酪大豆胨琼脂培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。每稀释级每种培养基至少制备2个平板。★阴性对照试验取试验用的稀释液1ml，置无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。每种计数的培养基各制备2个平板，均不得有菌生长。思考：需氧菌、霉菌及酵母菌检查中为什么要进行阴性对照试验？7、培养和计数（1）培养：除另有规定外，需氧菌培养3-5天；霉菌、酵母菌培养5-7天。（2）计数：一般胰酪大豆胨琼脂培养基用于需氧菌计数；沙氏葡萄糖琼脂培养基用于霉菌及酵母菌计数；菌落蔓延生长成片的平板不宜计数。点计菌落数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌数。8、菌数报告规则宜选取需氧菌平均菌落数小于300CFU;霉菌、酵母菌宜选择平均菌落数小于100CFU的稀释级，作为菌数报告（取两位有效数字）的依据。以最高的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告1g、1mL或10cm2供试品中所含的菌数。如各稀释级的平板均无菌落生长，或仅最低稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小于1时，以＜1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。下列表中为某些药品的微生物限度检查记录数据，试分别写出其菌落数。1：101：1001：1000药品13520药品296372药品3不可计20035药品42542药品50009、结果判定（1）供试品检出控制菌或其他致病菌时，按一次检出结果为准，不再复试。（2）供试品的需氧菌数、霉菌和酵母菌数其中任何一项不符合该品种项下的规定，应从同一批样品中随机抽样，独立复试两次，以3次结果的平均值报告菌数。（3）眼用制剂检出霉菌和酵母菌数时，须以两次复试结果均不得长菌，方可判供试品的霉菌和酵母菌数符合该品种项下的规定。（4）若供试品的需氧菌数、霉菌和酵母菌数及控制菌三项检验结果均符合该品种项下的规定，判供试品符合规定；若其中任何一项不符合该品种项下的规定，判供试品不符合规定。10、注意事项（1）药品在检验前，应保持原包装状态，不得开启，以免污染。同时药物需放置于阴凉干燥处，防止微生物繁殖，以免影响检验结果。凡原包装已被启开者，应另行取样。（2）供试品检验全过程必须符合无菌技术要求。使用灭菌用具时，不能接触可能污染的任何器物，灭菌吸管不得用口吹吸。（3）培养基的分装量不得超过容器的2/3，以免灭菌时溢出。包装时，塞子必须塞紧塞入2/3，以免松动或脱落造成染菌。（4）培养基配制后应在2h内灭菌，避免细菌繁殖；已熔化的培养基应一次用完，开启后不宜再用；且勿用电炉直接熔化琼脂培养基，应用水浴或微波炉加热；从供试品稀释至倾注琼脂培养基应在1h内完成。