临床基因检测技术职业教育医学生物技术专业教学38讲解.ppt

在测序仪运行的开始阶段，可以检查上机质量是否符合要求，当芯片载量大于80%，可以继续进行测序。测序完成后，需要对上机指标进一步进行质控，比如1.芯片的载量要符合要求，ISPloading80%，2.测序模板多拷贝比例。对文库进行乳液PCR扩增后，每一个DNA片都会形成它的成百上千的拷贝，所有这些单拷贝会在一个微珠上，这样是符合要求的。但也有可能微珠上携带的不是单拷贝，尽量控制多拷贝比例在32%以下。质控合格后，分析软件会自动根据测序数据给出相应的检测报告。检测报告中会给出受检者在13/18、21号染色体上是否有异常。无创产前基因检测主要检测13/18/21三体综合征。接下来给大家介绍这三种综合征。*我们先看唐氏综合征，他的核型就是21号染色体有三条，主要的临床症状特殊的五官面貌、智力低下、生长发育迟缓等。举个例子，可能有些人听过舟舟这个名字，以前还挺出名的，他就是唐氏儿。左边这张图是唐氏综合征的发病率，我们可以明显的看出其发病率随着年龄的增加而显著增高，35岁以后，唐氏儿的几率显著上升。但是60%-85%的唐氏儿是35岁以下的孕妇所生，主要是35岁以下孕妇基数大。所以各个年龄段的孕妇，都有必要进行无创筛查。我们再来看18-三体爱德华综合征。核型是18号染色体有三条，其临床特征有先天性心脏病，外表及多器官严重畸形，发育迟缓，40%存活至1个月，5%存活至1岁，1%存活至10岁。最后是13三体帕陶氏综合征。95%以上会死于子宫内，半数以上的患者会有前全脑畸形，常合并先天性心脏病，活产寿命4-6个月。三种综合征介绍完大家有没有发现一个特点，就是胎儿的存活率及寿命是越来越短，这是与遗传物质有关的，我们对染色体进行排号基本原则是按照从大到小进行编号的，除了21、22与性染色体。染色体越大其遗传物质越多，而相应的染色体增加编号越小危害越严重。我们再来看一下产前检测技术的对比，我们可以看出无创有较高检出率，较低的假阳性率，是产前筛查的理想技术。具有无创、安全、准确、早期、快速的特点。同时我们还需要关注这几个检测技术的适合孕周。血清学筛查为12-20周，羊水穿刺为16-22周。。。*磁珠法纯化时：磁珠B1纯化：大片段在磁珠上，我们需要的是上清。弃磁珠。磁珠B2纯化：大片段在磁珠上，我们需要的是磁珠上的大片段。弃上清。我们需要的游离DNA片段比较小。**磁珠法纯化时：磁珠B1纯化：大片段在磁珠上，我们需要的是上清。弃磁珠。磁珠B2纯化：大片段在磁珠上，我们需要的是磁珠上的大片段。弃上清。我们需要的游离DNA片段比较小。*五.操作步骤1实验前准备1.1将4℃保存的磁珠B1和磁珠B2取出，充分振荡均匀，室温平衡30分钟，备用。1.2根据《无创产前基因筛查DNA文库构建记录表》取出样本DNA，置于4℃冰箱，备用。1.3在《无创产前基因筛查DNA文库构建记录表》登记试剂批号信息。五.操作步骤组分反应体积（μl）DNA43.5末端修复缓冲液5末端修复酶1.5反应体系总量502末端修复2.1预先取出末端修复缓冲液，将其置于冰盒上，待融化后充分混合，取出末端修复酶瞬离后置于冰盒上。2.2根据下表试剂和样本数量在1.5ml离心管中依次加入除样本DNA外的其他试剂，配置成混合液。五.操作步骤五.操作步骤2末端修复2.3将混合液托手振荡混匀5秒，瞬时离心2秒，在冰盒上使用移液器将6.5μl混匀液分装到新的已做好标记的0.2mlPCR板孔中，根据试验记录表中的样本排序，依次将43.5μlDNA分别转至对应的PCR板孔中，并使用移液器反复吹打10-15次混匀。2.4在PCR板上封好封板膜，离心30秒，置于PCR仪进行如下反应：25℃，30min。注意事项：转DNA时，须复核样本加样孔是否准确

2末端修复2.5磁珠B1震荡3分钟，充分混匀，往浅孔板的每个孔中加入65μl磁珠B1。磁珠B2震荡3分钟，充分混匀，在另一浅孔板的每个孔中加入100μl磁珠B2。五.操作步骤注意事项：磁珠B1和磁珠B2不能分在同一块浅孔板中：分装磁珠时，磁珠须触底加入，以避免磁珠挂壁。分装磁珠B1和B2时，在浅孔板上标注B1和B2进行区分，避免混淆。1111111111+2末端修复2.6根据实验记录表的样本排序，依次将步骤5.2.4中的DNA反应液转移至对应的装有磁珠B1的浅孔板中，使用移液器反复吹打45次左右，将DNA和磁珠充分混匀，用干净的PE手套将浅孔板盖住，室温静置8分钟后，放置于24头磁力架上静置5分钟至澄清。五.操作步骤注意事项：此步使用的磁珠为磁