核酸乙型肝炎病毒讲解.pptx

核酸乙型肝炎病毒的核酸检测

HBV流行久远、传播广泛，是全球性公共卫生问题。全球3.5亿人携带HBV；我国为高流行区，感染率约60%，约8亿人感染过该病毒；HBsAg携带率：8%～10%，1.1-1.4亿人；慢性乙肝病人：1000万；80%原发性肝癌与HBV慢性感染有关。

30-50年急性感染慢性携带者缓解慢性肝炎稳定疾病进展肝硬化代偿性肝硬化肝癌死亡非代偿性肝硬化

一、乙肝病毒的生物学特性形态与结构①小球形颗粒：直径22nm；②管形颗粒：直径22nm，长度在50～700nm之间；③大球形颗粒：即Dane颗粒，直径42nm。

一、乙肝病毒的生物学特性

大球形（Dane）颗粒

HBV的小球形颗粒HBV的管形颗粒Dane颗粒

二、乙型肝炎病毒基因的控制

三、乙型肝炎病毒基因组特征正链（L-）负链（S+）黏性末端顺向重复序列（DR）

编码pre-s1，pre-s2和HBsAg三种抗原S基因区编码HBcAg,HBeAg两种抗原C基因区编码HBV-DNA多聚酶，逆转录酶活性P基因区编码HBxAg抗原，能激活HBcAg基因X基因区

S基因区前S1区、前S2区和S区：编码外膜蛋白（前S1、前S2、HBsAg），前S区与病毒的嗜肝性有关。

C基因区分前C区和C区两部分。编码212氨基酸残基组成的多肽称为乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）。C区编码产物为183个氨基酸残基组成的多肽序列，称为C蛋白（HBcAg）。

P基因区是HBVDNA中最大的一个ORF，与其他基因区均有重叠，编码产物是乙型肝炎病毒DNA的多聚酶蛋白(HBVDNAp）。

X基因区是HBVDNA中最小的一个ORF，编码产物为x蛋白(HBxAg),可能与病毒基因组的表达调控及HBVDNA的整合有关。x蛋白所诱生的抗体常见于原发肝细胞癌患者体内。

乙型肝炎病毒基因的编码蛋白pre-S1pre-S1蛋白pre-S2pre-S2蛋白SHBsAg（机体HBV感染的主要标志之一）pre-C+CHBeAg（HBV复制及具有强感染性指标）pre-Cpre-C蛋白CHBcAgPDNApXHBxAg

四、乙型肝炎的核酸检测技术及临床应用特异性和敏感度相对较高。不能进行准确的基因定量。普通PCR技术特异性高，灵敏度高。荧光定量PCR技术特异性好，但灵敏度不如PCR法。核酸杂交技术特异性和敏感灵敏度高，检测限为4.7×103copies/ml杂交捕获系统高通量、敏感性和特异性好操作繁琐、易污染、专门仪器基因芯片技术

1、普通PCR技术不能进行准确的基因定量、重复性差、扩增产物间污染所到的假阳性多、强致癌物溴化乙啶的使用等。不足特异性和敏感度相对较高。优点

2、荧光定量PCR技术在进行HBV-DNA扩增的同时进行定量，能准确地反映HBV-DNA的复制水平、病程变化和疗效等情况。目前临床最常用的方法。方法特异性高灵敏度好优点2.5ⅹ102~2.5ⅹ109copies/ml检测范围

3、核算杂交技术在进行HBV-DNA扩增将待测标本点状加样于硝酸纤维素薄膜上，与标记的HBVDNA寡核苷酸探针进行斑点杂交，从而检测待测标本中是否存在HBVDNA，可定性或半定量。方法特异性好，但灵敏度不如PCR法。方法较烦琐，但不需特殊仪器设备。特点1×106copies/ml或1-2pg/ml检测限

4、基因芯片技术PCR+芯片杂交+扫描仪检测。技术高通量、敏感性和特异性好。优点定性、操作繁琐、易污染、需专门仪器不足

四种HBV基因型在中国地域分布的主要概况HBV基因型主要分布地域比例A基因型仅见于少数地区(广西壮族自治区)1%B基因型长江以南30%C基因型长江以北57%D基因型少数民族较多的地区(西藏、新疆、宁夏等)8%

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