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医院PCR核酸扩增荧光检测实验和结果分析标准操作程序--第1页
XX医院核酸扩增荧光检测编号：C009
临床基因扩增实验和结果分析第一版
检测实验室标准操作程序第1页共4页
医院PCR核酸扩增荧光检测实验和结果分析标准操作程序
1目的
保证扩增及结果分析的标准化、规范化。
2使用范围
使用LightCycler型扩增仪的核酸扩增荧光检测实验室。
3操作人
XXX
4标准程序
4.1核酸提取、纯化、扩增、产物分析的具体操作见项目SOP
文件及仪器使用SOP文件；
注：目前，SOP文件的主要依据是生产厂家提供的检测试
剂盒说明书。
4.2核酸提取、纯化、加模板在样本处理区完成；
4.3扩增反应体系的配制、分装在试剂处理区进行；
4.3制备好的扩增混合液由传递窗转移至扩增区，上机扩
增；
4.5扩增程序的编程：日常检测活动中，操作者必须遵循仪
器使用SOP文件规定的路径。编程或修改路径参照仪器
说明书；
医院PCR核酸扩增荧光检测实验和结果分析标准操作程序--第1页
医院PCR核酸扩增荧光检测实验和结果分析标准操作程序--第2页
4.6标本标识的传递：以标本唯一性标识中的“序列号”作
为检测过程中的“检验号”进行传递；
4.7工作安排：每一项目每周至少完成一个批次的检测；
4.8在移取所需体积的血清及痰液后，立即盖紧原始标本管
盖，将标本继续保存于-20℃冰箱；
4.8.1原始标本保存一周后丢弃；
4.8.2如患者及医生对标本结果有异议，则需在一周内及时
提出意见，以便重新检测复核结果；
4.9结果分析标准程序
对于LightCycler结果曲线的分析，应按以下步骤进行：
全部曲线——阴性对照——阳性对照——阳性室内质控品
——阳性标准品——逐个分析（标出阳性标本和可疑标本）
——调整参数，获得较好的标准曲线，显示定量结果——登
记，发报告。
4.9.1整体曲线的观察
将所有曲线选中进行整体观察
a）观察是否存在污染情况（包括标本污染和试剂污染），
特别应注意大量曲
线在同一Ct值出现上涨的情况。
b）观察是否有光路传导阻滞或电压波动等机器原因形成
的异常曲线。
4.9.2阴性对照的分析
阴性对照：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知
医院PCR核酸扩增荧光检测实验和结果分析标准操作程序--第2页
医院PCR核酸扩增荧光检测实验和结果分析标准操作程序--第3页
阴性标本。
作用：用以监测实验室和前处理过程中是否存在污染。
4.9.3阳性对照的分析
阳性对照：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知
阳性标本。
作用：用以监测实验能否正常检出阳性标本，避免假阴
性的出现。
4.9.4阳性室内质控品的分析
阳性室内质控品：试剂中加入与待检标本进行同样处理
的已知或未知浓度的阳性室内质控血清。
作用：用以监控日常实验的精密度。
4.9.5阳性标
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