核酸核酸检测技术68讲解.pptx

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核酸核酸检测技术Nucleicaciddetectiontechnology琼脂糖凝胶电泳

核酸分离细胞裂解核酸分离纯化细胞裂解

核酸鉴定完整性浓度纯度凝胶电泳紫外分光光度法荧光光度法（一）核酸的鉴定核酸鉴定

浓度测定紫外分光光度法核酸分子在260nm有最大吸收峰当A260=1OD时C双链DNA=50μg/mlC单链DNA=40μg/mlC单链RNA=40μg/ml

纯度分析A260/A280比值通常：纯的DNAA260/A280=1.8污染：DNAA260/A280﹥1.8提示有RNA污染纯的RNAA260/A280=2.0﹤1.8提示有蛋白质或酚的污染

琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。其分析原理与其他支持物电泳最主要区别是：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。琼脂糖凝胶电泳常用于分离、鉴定核酸，由于这种方法操作方便，设备简单，需样品量少，分辨能力高，已成为基因工程研究中常用实验方法之一。琼脂糖凝胶电泳

配胶琼脂糖1XTAE电泳缓冲液

不同浓度琼脂糖分离DNA分子的范围琼脂糖浓度(%)分离范围(kb)0.35-600.61-200.70.8-100.90.5-71.20.4-61.50.2-42.00.1-3

溴化乙锭（EB）溴化乙锭是最常用的DNA和RNA凝胶检测染料，是一种DNA嵌入剂，能够插入双螺旋DNA碱基对之间。溴化乙锭的最大紫外吸收波长为300和360nm，最大发射波长为590nm。与溴化乙锭结合的DNA检出限为0.5-5.0ng/条带。

点样

loadingbuffer:上样缓冲液，一般为6×的缓冲液。功能主要有两个：第一，显示电泳的进程，以便我们适时终止电泳；第二，里边的成分甘油可以加大样品密度，从而使样本沉降到点样孔中，防止样品飘出点样孔。

跑胶电泳仪电泳槽1XTAE电泳缓冲液

成像

结果判读RNA总RNA有三条特征性区带28SRNA荧光强度为18SRNA的2倍DNA分子较RNA大，迁移率低DNA电泳图呈拖尾状RNA总RNA特征性区带荧光强度改变完整：降解：

真核生物RNA电泳的三条特征性区带

完整DNA电泳图降解DNA电泳图

核酸谢谢观看Nucleicaciddetectiontechnology

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