第二章仪器检测技术分光光度法讲解.ppt

第二章仪器检测技术分光光度法三、应用1、定性（1）比较光谱吸收特征的一致性按质量标准，将供试品与对照品用规定溶剂分别配成一定浓度的溶液，照紫外-可见分光光度法在规定波长范围内绘制吸收曲线，供试品和对照品的图谱应一致。所谓一致是指吸收曲线的峰位、峰形和相对强度均一致。例如地蒽酚软膏的鉴别方法为：取含量测定项下的溶液，照紫外-可见分光光度法测定，供试品溶液在440~470nm波长范围内的吸收光谱应与对照品溶液的吸收光谱一致。（2）比较光谱吸收特征数据的一致性例：取维生素B1，精密称定，加盐酸溶液（9→1000）溶解并定量稀释制成每1ml约含12.5μg的溶液，照紫外-可见分光光度法，在246nm的波长处测定吸光度，吸收系数（E1%1cm）为406~436。例丙硫异烟胺的鉴别：取本品的细粉适量，加乙醇溶解制成每1ml中含丙硫异烟胺20μg的溶液，滤过，取滤液照分光光度法测定，在291nm的波长处有最大吸收。（3）比较光谱吸收特征数据比值的一致性（比较吸收度或吸收系数比值的一致性）例丙酸倍氯米松的鉴别：取本品，精密称定，加乙醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含20μg的溶液，照紫外-可见分光光度法（附录ⅣA）测定，在239nm的波长处有最大吸收，吸收度为0.57～0.60；在239nm与263nm波长处的吸光度比值应为2.25～2.45。2、纯度检查例：华法林钠（抗凝血药）检查：酚酮：取本品，加5%氢氧化钠溶液制成每1ml中含0.125g的溶液，在385nm处测定吸收度，不得过0.30A=ECL例：葡萄糖注射液检查：5-羟甲基糠醛：操作方法：①测定液的配制：精密量取10%葡萄糖注射液10ml于100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀即得。②测定：取配制的测定液盛于1cm厚的石英池中，置预先校正好的紫外分光光度计的样品室中，以水为空白，在284±1nm波长处，测定其吸收度，重复三次，取其平均值。吸收度不得大于0.32.3、定量依据：朗伯-比尔定律A=ECL（1）标准曲线法取标准品，配制成一系列不同浓度的标准溶液，在相同条件下，分别测定其吸收度（2）标准对照法（对照品比较法）在相同条件下配制标准溶液和供试品溶液，在选定的波长处分别测定吸收度A对/A供=C对/C供（3）吸收系数法利用待测物质的吸收系数与测得的一定浓度时的吸收度进行含量测定的方法。例2、已知VB12在361nm处的E%1cm为207，现测得VB12水溶液的吸收度为0.414，L=1cm，计算溶液的浓度例3、精密称取VB12供试品0.02500g，加水溶解并定量稀释成1000ml，于1cm厚的吸收池中，在361nm处测得吸收度为0.507，E%1cm按207计算，计算VB12百分含量例4、取对乙酰氨基酚约40mg，精密称定，置250ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液50ml溶解后，加水至刻度，摇匀；精密量取5ml，置100ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶10ml，加水至刻度，摇匀。照分光光度法在257nm处测定吸收度，E%1cm按715计算，即得。W=0.04005g，