核酸核酸检测技术33讲解.pptx

核酸核酸检测技术的发展及应用前景NucleicaciddetectiontechnologyDNA的结构和功能

核酸NucleicaciddetectiontechnologyDNA的结构和功能

第一节现代分子生物学的建立及发展分子生物学就是一门从微观尺度揭示生命本质现象的一门科学，它以研究生物分子的结构与功能为对象，凭借基因克隆、基因扩增、基因测序等快速发展的分子生物学技术，为破解生命奥秘、探究疾病诊断、治疗及预防，实现精准化、个体化循证医疗打下基础。

1928年，Griffith体内转化试验，格里菲斯

1944年，Avery体外转化实验，艾弗里

1953年，沃森和克里克在自然杂志上发表论文宣布发现脱氧核酸结构模型

1956年，A,Kombery发现DNA聚合酶1959年，Uchoa第一次合成核糖核酸，实现了将基因内遗传信息通过RNA翻译成蛋白质的过程1968年，冈崎提出了DNA不连续复制模型1970年，Temin,Khorana等人发现了逆转录酶，补充完善了遗传信息传递的中心法则。

1983年，凯利·穆利斯发明了聚合酶链式反应

华裔学者分离的耐高温DNA聚合酶帮助解决PCR难题1973年，华裔学者钱嘉韵从美国黄石国家公园嗜热菌体内分离出一种耐高温DNA聚合酶。1986年，穆利斯将耐高温DNA聚合酶应用到PCR中，成功解决了DNA聚合酶高温变性、反复添加的技术难题。

人类基因组计划（HGP，1990-2005）由美国科学家于1985年提出，1990年正式启动；美国、英国、法国、德国、日本和中国科学家共同参与；解开人体内约2.5万个基因，30亿个碱基对的密码；人类基因组工作草图（遗传图、物理图、序列图）发表，标志着人类基因组计划成功。

第二节核酸检测的临床应用及前景以生物分子标记物为靶标，通过DNA分子杂交、聚合酶链式反应、DNA测序、生物芯片等技术手段，实现对微量生物样本、微量生物分子及其微小变化的快速检验。分子生物学检验

利用分子生物学检验技术检测人体各类标本中的内源性或外源性核酸物质存在、结构、表达量的变化，协助医生对疾病开展预防、诊断和治疗的一种技术。核酸检测技术

SARS-CoV-2

负责样品的入库、存放和出库；提取、纯化核糖核酸或脱氧核糖核酸；对提取后的核酸进行实时荧光定量聚合酶链式反应检测；构建文库，并根据测序标准进行文库质量的检测与鉴定；使用高通量测序仪对核酸文库进行碱基序列的测定；分析高通量测序仪得出的数据并出具报告；对高速冷冻离心机、移液器等仪器进行日常清洁、维护和管理。配置、存放和管理核酸提取试剂、建库试剂和测序试剂。核酸检测员的岗位职责

01临床病原微生物核酸检测02染色体和遗传性疾病基因检测03药物作用靶点核酸检测04HLA基因型检测核酸检测技术的临床应用及前景

1、临床病原微生物核酸检测方法简单：不需要分离、培养需要标本较少：标本取样方便、量少，易于储存特异性强：可针对多位点检测，阳性率较高灵敏度高：可精确到皮克（pg）检测时间短：2-4小时，抗体检查需要，IgM需要5-7天，IgM需要10-15天优点病毒核酸检测；细菌核酸检测；耐药相关基因检测临床应用

乙肝病毒DNA定量部分乙肝病毒感染者外周血中HBsAg可能由于S区变异、窗口期感染以及检测试剂和方法的局限性通过免疫学方法不能检出，而血液中仍然存在病毒。用乙肝病毒DNA-PCR的方法则可以准确检测。同时可以通过DNA含量，判断病毒复制水平和传染性强弱，动态监测药物疗效。序号HBV-DNA浓度传染性1109拷贝/ml日常生活接触传染性较强2105-106拷贝/ml日常生活接触传染性较小3105拷贝/ml日常生活接触几乎无传染性

2、染色体和遗传性疾病基因检测唐氏综合征和性染色体多倍体疾病染色体病基因检测遗传性耳聋、脆性X综合征、珠蛋白生成障碍性贫血（地中海贫血）遗传性疾病基因检测遗传性疾病和染色体病是由于染色体畸变、基因突变或缺失造成的疾病。常见的有：

珠蛋白生成障碍性贫血（地中海贫血）是由于α珠蛋白基因合成障碍，导致珠蛋白全部或部分缺失所引起的贫血，是世界上最常见的单基因病。分α、β两类，检测方法有所不同：α珠蛋白生成障碍性贫血：PCR+琼脂糖凝胶电泳β珠蛋白生成障碍性贫血：PCR+反向点杂交珠蛋白生成障碍性贫血的分子诊断α珠蛋白生成障碍性贫血琼脂糖凝胶电泳结果

3、药物作用靶点核酸检测目前常用的基因检测技术包括聚合酶链式反应（PCR）单链构象多态性分析（PCR-SSCP）DNA测序斑点杂交基因芯片技术

4、HLA基因型检测HLA分型方法主要包括血清学分型和DNA分型。多倍体疾病微量淋巴细胞毒试验或称补体依赖的细胞毒试验。存在着抗体亲和力较弱、效价较低、易产生交叉反应等缺点。血清学方法