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核酸核酸检测技术95讲解.pptx

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核酸Nucleicaciddetectiontechnology核酸检测技术核酸的理化性质

一、核酸的一般理化性质核酸为两性分子,通常表现为酸性;DNA是线性高分子,粘度极大,具有胶体性;电泳法分离核酸:不同核酸分子量和所带电荷不同;在碱性溶液中,DNA稳定性强于RNA。

二、核酸的紫外吸收特性在260nm波长有最大吸收峰,是由碱基的共轭双键决定的。这一特性常用作核酸的定性、定量分析。

OD260的应用OD260=1.0相当于50?g/ml双链DNA40?g/ml单链DNA(或RNA)20?g/ml寡核苷酸1.DNA或RNA的定量DNA纯品:OD260/OD280=1.8RNA纯品:OD260/OD280=2.02.判断核酸样品的纯度DNA其OD260/OD280在1.6-1.8之间,低于此范围表明蛋白质含量超标,高于此范围表明样品中含有RNA。

三、核酸的变性与复性定义在某些理化因素作用下,DNA双链解开成两条单链的过程(一级结构没有被破坏)。变性因素过量酸,碱,加热等。变性后理化性质的主要改变:OD260增高 粘度下降

DNA变性的本质是双链间氢键的断裂

增色效应:DNA变性时其溶液OD260增高的现象。DNA的紫外吸收光谱

解链曲线:在连续加热DNA的过程中以温度对A260值作图,所得的曲线称为解链曲线。

Tm:紫外光吸收值达到最大值的50%时的温度称为DNA的解链温度,又称融解温度(meltingtemperature,Tm)。其大小与G+C含量成正比。

核酸的复性在适当条件下,变性DNA的两条互补链可恢复天然的双螺旋构象,这一现象称为复性。热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性,这一过程称为退火(annealing)。定义DNA复性时,其溶液OD260降低。减色效应

核酸分子杂交(hybridization)热变性的DNA在复性过程中,具有碱基序列部分互补的不同的DNA之间或DNA与RNA之间形成杂化双链的现象。

核酸分子杂交的应用研究DNA分子中某一种基因的位置测定两种核酸分子间的序列相似性检测某些专一序列在待检样品中存在与否是基因芯片技术的基础

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