任务六血涂片染色宋晓光讲解.pptx

任务六

血涂片染色主讲教师：宋晓光

01教学目标02教学重点难点03教学内容04课后拓展目录

01教学目标

知识目标能力目标素质目标思政目标教学目标熟练掌握瑞氏染色法原理；了解吉姆萨染色法原理血液细胞染色结果熟悉染色注意事项熟练掌握瑞氏染色法操作流程；了解吉姆萨染色法操作流程能使用显微镜观察染色后细胞形态独立完成实验的能力无菌操作意识培养学生细致、耐心、精益求精的工作作风

02教学重难点

教学重点瑞氏染色法操作流程和结果观察教学难点瑞氏染色法注意事项教学重难点

03教学内容

血涂片染色瑞氏染色法吉姆萨染色瑞吉氏染色法

1.瑞氏染料的组成由酸性染料伊红（E-）和碱性染料美兰(M+)组成的复合染料溶于甲醇制备而成。碱性染料阳离子染料，能接受质子。如亚甲蓝、天青。能结合酸性物质并染色，如淋巴细胞及嗜碱性粒细胞染成蓝色。酸性染料阴离子染料，能释放质子。如伊红。能结合细胞的碱性成分并染色，如血红蛋白、嗜酸性颗粒成分等染成红色。固定着色合并进行，简便，染色时间短，WBC特异性颗粒着色较好，细胞核着色较差。一、瑞氏染色法教学内容细胞质着色较好

教学内容2.染色原理物理作用毛细管现象、渗透、吸收、吸附作用等化学作用：碱性染料在溶媒中为阳离子型，易与组织和细胞内带负电荷的酸性物质结合；而酸性染料在溶媒中为阴离子型，与带正电荷的碱性物质结合。蛋白质的化学性质：蛋白质中的氨基酸含有不同数量的氨基（-NH2）和羧基（-COOH），同时还有其它活性基团。在游离状态时，-NH2获得一个H+变成带正电的-NH3+，而-COOH失去一个H+变成带负电的-COO-。分别与不同染料结合。周围环境的酸碱度：如环境pH＜pI，则蛋白质带正电，结合酸性染料；反之，pH＞pI，则结合碱性染料。细胞的染色既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用，各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样

教学内容血红蛋白，嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结果，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性蛋白质，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫色，称为中性物质。M+Cl+Na+E→ME+NaCl美蓝伊红伊红化美蓝（瑞氏染料）

3.染色流程用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上。加瑞氏染液覆盖血膜，固定1min。滴加等量或稍多的缓冲液，混匀，染色5-10分钟。用清水冲洗，待干后镜检。

教学内容显微镜下观察染色效果

4.注意事项血膜要干透后才能染色，否则染色时易脱落.染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关，一般染液淡、染色时间长些效果好。染液不能过少，以防蒸发沉淀。冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲，防止染料沉着，冲洗时间也不能长。染色过淡，可复染。染色过深可用水冲洗或浸泡，还可用甲醇脱色。

二、吉姆萨染色法

吉姆萨染液由天青，伊红溶于甲醇组成。染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。但本法对细胞核和寄生虫着色较好，结构显示更不清晰，而胞质和中性颗粒则着色较差。为兼顾二者之长，可用复合染色法。即以稀释吉姆萨液代替缓冲液，按瑞氏染色法染10min。或先用瑞氏染色法染色后，再用稀释吉姆萨复染。1.染色原理

甲醇固定干燥血膜3-5min。将血膜在染液中浸染10-30min。流水冲洗,待干后镜检。2.染色流程

三、瑞氏-吉姆萨染色法

将瑞特染料和吉姆萨染料按一定比例混合后对细胞进行染色，其染色原理同瑞特和吉姆萨染色法，但染色效果更佳，因为其综合了瑞氏和吉姆萨染色法的优点。1.染色原理

血片滴加染液5滴，并立即将染液盖满血膜，2min后加入pH6.4-6.8磷酸盐缓冲液（同瑞氏染液）10滴，10min后用流水冲洗干净，待干后镜检。2.染色流程

瑞氏染液和吉姆萨染液对细胞进行染色时有各自的显色特征，前者对细胞质和颗粒着色较好，后者对细胞核结构显示清晰。因此将二者结合，能取长补短、集中优势，用该混合染液对血细胞进行染色，其细胞核、细胞质和细胞内颗粒均着色鲜艳，对比鲜明。瑞氏-吉姆萨混合染色法是临床上广泛使用的方法。四、方法学评价

五、课堂小结六、布置作业序号内容平台1瑞氏染色原理及注意事项学习通2染色方法学评价智慧职教3瑞氏染色流程学习通染色原理注意事项爱学习的孩子才是好孩子

04课后拓展

鼓励学生参加检验协会开展的义诊和见习活动，强化学生采血技能。课后拓展积极参加全国检验技能大赛，全面提升学生综合素质。

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