半抗原免疫分析全面.ppt

夹心法Sandwich竞争法固相01酶02底物03缓冲液04仪器05（二）ELISA所用试剂材料1、固定相聚次亚乙烯2、最常用的标记酶**苹果酸脱氢酶(MDH):多用于尿样的均相EIA。3．6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G-6-PD):通常用于均相EIA。辣根过氧化物酶(HRP):约有50％的EIA使用此酶。碱性磷酸酯酶(AP):AP标记的结合物性质稳定，其活性可用分光光度计或荧光计测量。β-半乳糖苷酶(β-Gal):适用于均相EIA和非均相EIA。AB四甲基联苯胺(TMB)邻苯二酚(OPC)3、最常用的底物PBS(T)01010203Tris-HClNa3N是HRP（辣根过氧化物酶）的抑制剂02034、缓冲液4、仪器酶标仪**半抗原免疫分析ABC*内容一、基本概念抗原抗体二、免疫分析方法分类ELISA原理与方法方法建立-苏丹红为例**PARTONE抗原antigen,Ag抗原的概念抗原(Antigen,Ag)是一类能刺激机体免疫系统产生特异性免疫应答,并能与相应的免疫应答产物在体内或体外发生特异性结合的物质.完全抗原与半抗原完全抗原（complexantigen):既具免疫原性又有免疫反应性的物质.如:大多数蛋白质.半抗原(hapten):仅有免疫反应性而无免疫原性的物质.如:大多数多糖、类脂、某些药物.半抗原+载体(蛋白质)完全抗原PARTTWO共同抗原与交叉反应共同抗原与交叉反应共同抗原(Commonantigens)：存在于两种不同的抗原之间的相同或相似的抗原决定簇，称为共同抗原。交叉反应(Cross-reaction)：由于存在共同抗原造成抗体对具有相同或相似决定簇的不同抗原发生反应，此称为交叉反应。检测意义：假阳性（避免）多残留检测（利用）01农药、兽药、生物毒素、重金属、维生素、防腐剂、植物激素等半抗原02在食品安全、植物学、环境检测等领域，主要是半抗原类物质。抗体

antibody,Ab两者既是好朋友，又是一对冤家。抗原与抗体是天生的一对，谁也离不了谁；一、基本概念抗体（Antibody，Ab）指B淋巴细胞受抗原刺激后活化、增殖、分化成为浆细胞，产生的能与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。存在形式：膜型（membraneimmunoglobulin,mIg）—B细胞膜上的抗原受体；分泌型(secretedimmunoglobulin,sIg)—分泌进入体液,介导体液免疫应答。二、免疫球蛋白的分子结构免疫球蛋白的基本结构：由四条多肽链组成，呈“Y”或“T”型组成：2条长链，又称重链（Heavychain，H链）：含450-550aa，分子量为55-75KD。2条短链，又称轻链（Lightchain，L链）：含214aa，分子量为25KD。2.分类、分型：（1）根据重链氨基酸组成、序列及结构的差异，将Ig分为五类：IgM(μ)、IgG(γ)、IgA(α)、IgD(δ)、IgE(ε)亚类：IgG：IgG1,IgG2,IgG3,IgG4IgA：IgA1,IgA2IgM:IgM1,IgM2（2）分两型：根据轻链氨基酸组成、序列及结构的差异，可将轻链分为两型：κ和λ型每一Ig单体分子两条重链必须同类，两条轻链必须同型。PARTTHREE抗体的制备方法3.基因工程抗体(GeAb):第三代抗体由基因重组技术制备的抗体,称为基因工程抗体。嵌合抗体(chimericAb)人源抗体（humanizedAb)双特异性抗体（bispecificAb)Fab/ScFV（singlechainFVfragment)单域抗体（singlechainAb)抗体的结构与功能的关系，所展现出的生物学功能是其结构的完美表演者。分析方法分类几种常用免疫分析技术ELISA侧流免疫层析分析方法的建立分析数据的拟合内容免疫分析技术常用的免疫标记物质类别标记物用途荧光素