检验技术离心机.ppt

*1．差速离心法是以不同离心力来分离不同质（沉降系数）的微粒的一种动力学方法，因不同的粒子在同一离心条件的离心力场中沉降速度不同，若不断增加相对离心力，一个非均匀混合液内的大小、形状不同的粒子将分步沉淀。原理：速度逐渐提高，样品按大小先后沉淀第39页,共53页，星期六，2024年，5月*用差速离心法分离已破碎的细胞各组份特点及应用：特点：分辨率不高；离心次数多，操作繁杂；产品的纯度和回收率都达不到理论值。应用：用于组织匀浆液中细胞器和病毒的分离及其他分离手段之前的粗制品提取。如破碎细胞各组分(细胞核、细胞膜碎片、线粒体、溶酶体、核糖体)的沉淀分离。第40页,共53页，星期六，2024年，5月*2．密度梯度离心法原理：将样品加在惰性梯度介质中进行离心沉降或沉降平衡，在一定的离心力下把颗粒分配到梯度中某些特定位置上，形成不同区带的分离方法。分类：依据离心分离原理。（连续密度梯度离心法）（不连续密度梯度离心法）第41页,共53页，星期六，2024年，5月*(1)速率区带离心法原理：在离心前于离心管内先装入密度梯度介质(如蔗糖)，把待分离的样品铺在梯度液的顶部、离心管底部或梯度层中间，与梯度液一起离心。靠近旋转轴处的介质密度最小，离旋转轴最远处的介质密度最大，但最大介质密度必须小于样品中粒子的最小密度。这种方法是根据分离的粒子在梯度液中沉降速度的不同，使具有不同沉降速度的粒子处于不同的密度梯度层内分成一系列区带，达到彼此分离的目的。第42页,共53页，星期六，2024年，5月*梯度液（聚蔗糖(ficoll)、硅溶胶(pereoll)及蔗糖(sucrose)）在离心过程中以及离心完毕后，取样时起着支持介质和稳定剂的作用，避免因机械振动而引起已分层的粒子再混合。第43页,共53页，星期六，2024年，5月*特点及应用：特点：分辨力高，但离心时间要严格控制。应用：速率区带离心法是一种动力学方法，适用于测定生物大分子颗粒的沉降系数。速率区带离心是一种不完全的沉降，沉降受物质本身大小的影响较大，一般应用于物质大小相异而密度相同的情况。第44页,共53页，星期六，2024年，5月*(2)等密度区带离心法原理：根据样品组分的密度差别进行分离纯化，一般是将待分离的样品铺在梯度液顶上或和梯度液先混合，密度梯度液柱的密度范围很大，液柱底部的密度明显大于样品组分的密度。如果样品中有几个密度不相同的组分，它们将分别集中于密度梯度液柱中相应的密度位置上，形成几个分离的区带，收集各个区带即得到各个提纯的组分。第45页,共53页，星期六，2024年，5月*分辨力高，耗时。是一种测定生物大分子或颗粒的浮力密度的静力学方法。此法一般应用于物质的大小相近，而密度差异较大时，如分离核酸、亚细胞器等，也可以分离复合蛋白质，简单蛋白质不适用。梯度介质通常为氯化铯(CsCl)特点及应用：第46页,共53页，星期六，2024年，5月*二、分析离心法目的:为了研究生物大分子的沉降特性和结构，而不是专门收集某一特定组分。方法:使用特殊的转子和检测手段，连续监视物质在一个离心场中的沉降过程沉降速度法沉降平衡法等密度区带分析离心法第47页,共53页，星期六，2024年，5月*特点:在短时间内，用少量样品就可以得到一些重要信息确定生物大分子是否存在、其大致的含量计算生物大分子的沉降系数结合界面扩散，估计分子的大小，检测分子的不均一性及混合物中各组分的比例测定生物大分子的相对分子质量检测生物大分子的构象变化第48页,共53页，星期六，2024年，5月*三、普通低速离心机使用的注意事项稳定平衡限速清洁第49页,共53页，星期六，2024年，5月*第四节高、超速离心技术一、高、超速离心机的组成及特点二、高、超速离心机的机型介绍和应用三、超速离心在医学中的应用四、高、超速离心机操作的注意事项第50页,共53页，星期六，2024年，5月*一、高、超速离心机的组成及特点1．高、超速离心机的驱动装置2．高、超速离心机的温度控制3．超速离心机的真空系统4．高、超速离心机的转头5．高、超速离心机离心管的选用速度控制系统过速保护系统装甲钢板密闭红外线射量感受器解决温度和摩擦力的影响角转头和水平转头选用塑料试管第51页,共53页，星期六，2024年，5月*二、高、超速离心机的机型介绍和应用三