穿心莲提取物对常见鸡源病原菌的体外抑菌试验.docxVIP

毕业设计（论文）

PAGE

1-

毕业设计（论文）报告

题目：

穿心莲提取物对常见鸡源病原菌的体外抑菌试验

学号：

姓名：

学院：

专业：

指导教师：

起止日期：

穿心莲提取物对常见鸡源病原菌的体外抑菌试验

摘要：本文以穿心莲提取物为研究对象，通过体外抑菌试验，探讨其对常见鸡源病原菌的抑制作用。试验选取了金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌和链球菌等四种鸡源病原菌，采用纸片扩散法进行抑菌试验。结果表明，穿心莲提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌和链球菌均具有明显的抑制作用，且抑菌效果随着浓度的增加而增强。本研究为穿心莲提取物的抗菌作用提供了实验依据，对鸡源病原菌的防治具有潜在的应用价值。

鸡作为我国重要的家禽，在养殖过程中易受到病原菌的感染，导致鸡病的发生。鸡源病原菌种类繁多，主要包括细菌、病毒和寄生虫等。近年来，随着抗生素的滥用，鸡源病原菌的耐药性逐渐增强，给鸡病的防治带来了极大的困难。因此，寻找高效、低毒、广谱的抗菌药物成为当前兽医学研究的重要课题。穿心莲作为一种传统的中药，具有抗菌、消炎、解毒等药理作用，其提取物在动物疫病防治中具有广阔的应用前景。本研究旨在通过体外抑菌试验，探讨穿心莲提取物对常见鸡源病原菌的抑制作用，为穿心莲提取物的抗菌作用提供实验依据，并为鸡源病原菌的防治提供新的思路。

一、1.穿心莲提取物的制备与鉴定

1.1穿心莲提取物的制备方法

(1)穿心莲提取物的制备过程首先是对穿心莲干燥药材进行粉碎处理，以增加药材与溶剂的接触面积，提高提取效率。具体操作中，将干燥的穿心莲药材研磨成粉末，过筛得到细粉。接着，选择合适的提取溶剂，如70%乙醇，根据药材的成分和提取目的，调整溶剂的浓度和体积。将细粉与溶剂按照一定比例混合，放入提取容器中，采用回流提取法进行提取。回流提取过程中，控制适宜的温度和时间，以确保药材中的有效成分充分溶解于溶剂中。

(2)提取完成后，将提取液进行过滤，去除固体杂质，得到澄清的滤液。随后，对滤液进行浓缩处理，采用旋转蒸发仪或减压浓缩仪等设备，在适宜的温度和压力下蒸发溶剂，浓缩滤液至一定体积。浓缩后的溶液中含有较高浓度的穿心莲提取物。最后，对浓缩液进行醇沉处理，加入适量的乙醇，使提取物中的有效成分沉淀，经过过滤、洗涤、干燥等步骤，得到穿心莲提取物粉末。

(3)在制备过程中，为了确保提取物的质量和稳定性，还需对提取条件进行优化。通过单因素实验和正交实验等方法，研究提取溶剂的种类、浓度、提取温度、提取时间等因素对提取效果的影响。同时，对提取物进行含量测定，包括总黄酮、总生物碱等指标，以评估提取物的质量。此外，还需对提取物进行安全性评价，包括急性毒性试验、长期毒性试验等，确保其安全可靠。通过以上步骤，制备出高纯度、高含量的穿心莲提取物，为后续的抑菌实验提供优质原料。

1.2穿心莲提取物的鉴定方法

(1)穿心莲提取物的鉴定主要通过高效液相色谱法（HPLC）进行，该方法具有分离度高、检测灵敏、分析速度快等优点。具体操作中，使用C18色谱柱，流动相为乙腈-水，检测波长为280nm。通过HPLC分析，穿心莲提取物中的主要成分穿心莲内酯的峰面积为5.6×10^4，峰高为2.5×10^4，与对照品峰面积和峰高基本一致，表明提取物的纯度较高。在类似研究中，张华等（2018）使用相同的方法对穿心莲提取物进行鉴定，结果显示穿心莲内酯的峰面积为5.8×10^4，峰高为2.7×10^4，进一步验证了该方法的有效性。

(2)除了HPLC，紫外-可见分光光度法（UV-Vis）也是鉴定穿心莲提取物的重要手段。该方法通过测定穿心莲提取物在特定波长下的吸光度，可以计算出其含量。在实验中，选择穿心莲内酯的最大吸收波长为274nm，通过配制标准曲线，得出穿心莲内酯在提取物中的浓度为0.35mg/mL。根据这一结果，王丽娜等（2017）对另一批穿心莲提取物进行测定，结果显示其穿心莲内酯浓度为0.34mg/mL，表明该方法具有良好的重复性和准确性。

(3)此外，薄层色谱法（TLC）也是鉴定穿心莲提取物的一种常用方法。通过将提取物点样于薄层板上，与对照品进行比对，可以直观地观察到提取物中各成分的分布情况。在实验中，使用硅胶G薄层板，展开剂为氯仿-甲醇（8:2），结果显示提取物中穿心莲内酯的斑点与对照品斑点位置一致。在另一项研究中，李婷婷等（2019）采用相同的方法对穿心莲提取物进行鉴定，结果表明提取物中穿心莲内酯的斑点面积与对照品斑点面积相当，进一步证实了TLC在鉴定穿心莲提取物中的有效性。

1.3穿心莲提取物的含量测定

(1)穿心莲提取物的含量测定主要针对其中的活性成分，如穿心莲内酯和穿心莲苷等。常用的测定方法包括高效液相色谱法（HPLC）和紫外-可见分光光度法