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DB21/TXXXX—2019

榛树病害诊断技术规程

1范围

本标准规定了榛树（平榛CorylusheterophyllaFisch.和平欧杂种榛CorylusheterophyllaFisch.×CorylusavellanaL.）常见侵染性病害和非侵染性病害的种类及诊断技术。

本标准适用于辽宁省内平榛和平欧杂种榛病害诊断。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T28097苹果黑星病菌检疫鉴定方法SN/T2589植物病原真菌检测规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

3.1榛属

榛属（CorylusL.）为榛科（Corylaceae）落叶灌木或小乔木。平榛和平欧杂种榛生物学特性和生态学特性参见附录A和附录B。

3.2侵染性病害

有病原生物因素侵染造成的病害。

3.3非侵染性病害

没有病原生物参与，只是由于植物自身的原因或由于外界环境条件的恶化引起的病害。

3.4症状

植物受病原生物或不良环境因素的侵染后，内部的生理活动和外观的生长发育所显示的某种异常状态。

3.5病状

在病部所看到的状态，如褐色的斑点、透明的条纹，枝叶萎蔫或树干开裂等。

3.6病症

在病部上出现的病原物的个体，如真菌的菌丝体、菌核、孢子器、黑粉、白粉、锈状物、霉状物，细菌的菌脓等。

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3.7柯赫氏法则

柯赫氏法则又称柯赫氏假设或柯赫氏证病律，是确定侵染性病害病原物的操作程序。在病植物上常伴随有一种病原微生物存在，该微生物可在离体的或人工培养基上分离纯化而得到纯培养，将纯培养接种到相同品种的健株上，出现症状相同的病害，从接种发病的植物上再分离到其纯培养，性状与接种物相同。

4诊断准备

4.1诊断仪器

显微镜、电子天平、超净工作台、高压灭菌锅、生物培养箱等（GB/T28097苹果黑星病菌检疫鉴定方法）。

4.2诊断用具

解剖刀、镊子、三角瓶、培养皿、载玻片、盖玻片等。

4.3试剂和培养基准备

0.1%的升汞、70%的酒精、无菌水、PDA培养基。

4.4样品采集与记录

采集疑似病害样品，对其症状特点描述记载，如有病斑的叶片、枯萎的枝条、树干或果苞等。

5诊断

5.1诊断部位

榛树叶片、枝条、树干和果苞。

5.2诊断时间

刚出现病害症状时至病害稳定期（6月上旬至9月中旬）。

5.3诊断方法

5.3.1榛树病害诊断方法

调查有疑似症状的叶片、枝条、树干或果苞，依据出现典型症状的病状和病症，对比参照附录C，确定常见病害的类别。新发、可疑病害借助病组织病原菌分离、显微形态观察及分子鉴定等方法进行确定（SN/T2589植物病原真菌检测规范）。

5.3.2分离培养

5.3.2.1植物组织选取与处理

选取疑似感病植物组织，从病斑的病健交界处切取3mm～5mm的方块，在70%的酒精中浸3s～5s钟后即刻移入0.1%的酸性升汞水溶液中处理0.5min～3min（消毒时间长短依据病部组织的幼嫩和老化程度而定）,再以无菌水换洗3次。

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5.3.2.2病原菌培养

将处理好的待培养植物组织移至PDA平板培养基上，于25℃温箱中培养。待2d～3d后观察平板上是否有病原物长出，以此进一步确定侵染性病害和非侵染性病害。

5.3.3柯赫氏法则验证

进行柯赫氏法则验证，确定所获菌株为致病菌。

5.3.4镜检

选取疑似侵染性病害植物组织病健交界处切片，置于载玻片中央的水滴中，镜检，观察病原特征（真菌病害：菌丝体和分生孢子；细菌病害：菌溢现象；病毒病害：包含体），以此初步区分侵染性病害和非侵染性病害。

5.3.5病原鉴定

对于侵染性病害要根据分离培养结果，查阅《真菌鉴定手册》等相关资料对病原进行鉴定，也可通过传统形态学和分子生物学相结合的方法进行鉴定。对于非侵染性病害依据出现典型的症状和症状发生地区气候条件、栽培管理条件及榛园周边农田药剂使用情况等进行调查诊断。

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附录A（资料性附录）

平榛生物学生态学特性

A.1生物学特性

平榛（CorylusheterophyllaFisch．）为榛科（Corylaceae）榛属（CorylusL.）植物，落叶灌木，丛生，株高1m～2m，单叶互生，具锯齿，叶倒卵形或矩圆形，顶端平截或凹缺，中央具三角形突尖，花单性同株，雄花为柔荑花序，雌花排成头状花序，坚果外具由苞片发育增