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以家为家,以乡为乡,以国为国,以天下为天下。——《管子》
常规HE染色
白腊包埋的组织切片必需颠末脱蜡水洗处置才能染色,让水溶性染料渗入组织中,含蜡的组
织切片无法进行任何染色。所以,在染色前必需用二甲苯或替换剂进行彻底脱蜡,颠末乙醇
洗后,再用水洗。即白腊组织切片→二甲苯→乙醇〔无水乙醇,95%,80%〕→水。人们通常
把这个过程叫做切片脱蜡至水。脱蜡至水是染色前的必需完成的底子步调。一般脱蜡至水的
时间和步调如下:
HE染色脱蜡至水步调
步调挨次试剂时间
1二甲苯Ⅰ脱蜡5min
2二甲苯Ⅱ脱蜡5min
3二甲苯Ⅲ脱蜡5min
4无水乙醇浸洗1min
595%乙醇Ⅰ浸洗1min
695%乙醇Ⅱ浸洗1min
780%乙醇浸洗1min
8自来水冲刷3-5min
冰冻切片和细胞涂片样品的染色不需要颠末脱蜡至水步调,水洗后直接用苏木精和伊红
染色。
染色是操纵染料的不同作用,使组织与染料以不同方式进行结合。常规染色是苏木精和
伊红染色〔H.E〕。特殊染色〔specialstains〕和组织化学〔免役组织化学〕染色是按照诊
断的需要对组织中的某些成分进行非常规的染色。
HE染色用的苏木精是一种树木苏木的一种氧化产物,因为这种树非常罕见,大都氧化
苏木精是合成品。苏木精必需氧化成熟后才能使用。苏木精染液需要预先配制,放置几个月
自然氧化成熟。或购置成熟过的商品苏木精,也可在苏木精液中加一些成熟剂。
苏木精本身对组织没有染色作用,需要“媒染剂〞与组织连接,媒染剂是铁,铝,钨等
由这类正离子金属提供。矾也是苏木精常用的媒染剂,如Harris苏木精的配制以硫酸铝钾
〔钾明矾〕或铵明矾作为媒染剂。不同媒染剂配制的苏木精染色强度不同。苏木精作为一种
根底染料对细胞核的核酸具有必然的亲和力。
苏木精不是“退行性〞就是“进行性〞染色,退行性染色是把切片在染液内留一段时间,
然后从染液里出来用盐酸乙醇分化,去除过染的一局部。这种方法最适合多量量的染色。进
行性染色切片在染液中染到本身想要得染色强度。如冰冻染色。冰冻染色比拟简单,但染色
质量不如成批处置的好。
伊红是一种酸性染料,和细胞的胞浆成分具有亲合力。有各种合成的伊红可共使用,它
们的颜色各异,但作用都一样。在尝试室中伊红比苏木精更不变,伊红很少发生染色问题。
独一可以见到的问题是过染〔overstaining〕,尤其是脱钙组织。
苏木精液配制
Harris苏木精液苏木精1g
无水酒精
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