植物染色体倍性分析实用文档.ppt

嵌入性染料荧光染料DAPI，直接与细胞内的DNA双螺旋结构中的A-T碱基对结合，从而使细胞在激发光的照射下发特定波长的光，通过判断发射光的强弱来推算A-T碱基对的多少，从而得知DNA的倍性关系。第7页,共27页，星期六，2024年，5月信号检测与分析当细胞携带荧光素标记物，通过激光照射区时，受激光激发，产生代表细胞内不同物质、不同波长的荧光信号，这些信号以细胞为中心，向空间360度立体角发射，产生散射光和荧光信号,下图是以激发光光源波长488nm为例的示意图：第8页,共27页，星期六，2024年，5月荧光信号的线性测量线性放大：即放大器的输出与输入是线性关系，细胞DNA含量、RNA含量、总蛋白质含量等的测量一般选用线性放大测量。在倍体分析实验中，待测样本的倍性（荧光强度）为标样的整数倍，在测量时一定选择线性放大。第9页,共27页，星期六，2024年，5月倍体分析仪数据的显示－－－直方图横坐标，X轴表示光强度，强度高的光信号靠右侧显示。纵坐标，Y轴表示数量累计，相同强度的光信号在同一横坐标点（通道）内向Y轴方向累计。DNA-DAPI第10页,共27页，星期六，2024年，5月倍体分析仪测试流程第11页,共27页，星期六，2024年，5月倍体分析方法比较染色体计数法实验操作复杂耗时长、检测通量低（不适合大量材料的倍性鉴定）Partec倍体分析仪取样容易，不受取材的时间季节限制可以检测大量样本，节约时间，每天可测超过200个样本，通过改进流程每天可测试1000个样本仪器自动识别倍体峰值第12页,共27页，星期六，2024年，5月CyFlow?PA简单快速---DNA倍体标本上机检测时间小于2分钟；采用Partec专利染色技术，无细胞壁标本处理及染色时间小于2分钟，有细胞壁标本处理及染色时间小于15分钟。操作便捷---无需制备和染色中期染色体。适用于DAPI和PI（需配备532nm绿色激光器）染色的生物DNA倍体检测；用途广泛---任何植物样品均可被检测：叶、秧苗、根茎、花、果实、种子等。任何动物、海洋及淡水生物均可被检测。高精确性---绝大多数动植物倍体检测精度可以达到±1染色体。灵活便携---结构紧凑，便于移动，适用于多种工作场所。第13页,共27页，星期六，2024年，5月Partec倍性分析仪在植物领域的突出优势可以实现2分钟内完成所有植物（花、叶、茎、根、果实、种子、花粉）样本的染色制备及上机检测；最少的样品处理步骤；可以实现最为精准的DNA含量检测；最简单的仪器操作程序；最省时省力且省钱的后期维护保养；可以为您的论文添加世界上最为完美的DNA峰直方图；可以在您的研究领域开创与DNA含量相关的新篇章。第14页,共27页，星期六，2024年，5月样本的处理（以植物叶片为例）所需试剂：PartecDNA二步法试剂其它工具：刀片、培养皿、30um滤网，样品管、加样枪等第15页,共27页，星期六，2024年，5月实验步骤取待测新鲜植物叶片0.5平方厘米，置于培养皿中。取400ul裂解液加于植物叶片周围，裂解1分钟。裂解完成后，用刀片将叶片切碎。向切碎的植物叶片中加入染液1600ul，染色1分钟。将培养皿中的液体用30um滤网过滤至样品管中上样。第16页,共27页，星期六，2024年，5月注意事项所取植物叶片需新鲜，易于切碎，不易过大或过小。在切叶片的过程中，尽量切碎植物叶片，避免割植物叶片的情况发生。不同样本的染色时间不同，应根据样本特性决定染色时间。大多数植物样本在裂解和染色的时间只需要一分钟种。对于某些特殊的样本，需在研究中摸索最佳的染色时间，适当延长。第17页,共27页，星期六，2024年，5月上样过程中的注意事项选择合适的电压（gain）值，过高的电压值会放大背景噪声，电压值过小则无法采集数据。点击“”调节。随着染色时间的增长，样本的信号峰会向右移动，而充分染色的样本不会发生信号右移的情况。实验中如果发生同一样本的重复性不好，应考虑此种情况。为了得到最完美的实验结果，建议适当降低样本流速，将标样的位置放到50的位置上。如果画面左侧有大量噪声信号出现，请适当提高阈值“”第18页,共27页，星期六，2024年，5月阈值阈值用来定义能够被光电倍增管识别的最小或最大信号强度，低于阈值下限或高于阈值上限的信号将不被光电倍增管识别，也不在图形中显示。第19页,共27页，星期六，2024年，5月DNAControlUV-UVDArabidopsis