《分光光度法补充》课件.pptVIP

分光光度法补充

分光光度法的基本原理物质的吸收特性不同物质对特定波长的光具有不同的吸收能力，这种特性称为物质的吸收光谱。比尔-朗伯定律溶液的吸光度与溶液的浓度和光束通过溶液的光程成正比，即A=εbc。分光光度计测量分光光度计通过测量特定波长光通过溶液后的透光率或吸光度来确定溶液中待测物质的浓度。

分光光度法的应用范围化学分析定量分析：测定物质的浓度定性分析：识别物质的种类生物学研究蛋白质、DNA、RNA的浓度测定酶活性、细胞生长等指标的检测食品安全食品添加剂、农药残留等的检测食品成分分析，如蛋白质、脂肪、糖含量环境监测水质、大气、土壤中污染物的检测环境监测数据的分析

分光光度法的主要特点操作简便仪器操作简单易懂，无需复杂的技术操作。快速高效分析速度快，适用于大量样品的检测。准确可靠定量分析结果准确，重复性好。经济实惠仪器价格相对低廉，维护成本低。

分光光度法的基本流程1样品制备根据样品的性质，选择合适的溶剂进行溶解或稀释，使样品溶液的浓度处于仪器测量的最佳范围。2空白试验用溶剂或试剂空白进行比对，消除溶剂或试剂带来的干扰。3测量将样品溶液放入比色皿中，在分光光度计上进行测量，获得样品在特定波长下的吸光度或透光率。4数据处理根据测得的吸光度或透光率，结合标准曲线或已知的摩尔吸光系数，计算出样品中目标物质的含量。

分光光度计的构造及工作原理分光光度计主要由光源、单色器、样品池、检测器和显示系统组成。光源发出光束，通过单色器后得到单色光，再通过样品池照射样品。样品吸收部分光，透射部分光，检测器接收透射光，将光信号转化为电信号，显示系统显示结果。

分光光度法的样品制备1取样根据实验目的和样品性质选择合适的取样方法，确保样品代表性。2预处理根据样品类型进行预处理，如溶解、过滤、萃取、浓缩等，去除干扰物质。3配制标准溶液使用已知浓度的标准物质配制标准溶液，用于建立标准曲线。4空白对照使用不含待测物质的溶液进行空白对照，消除试剂和溶剂的影响。

分光光度法的标准曲线制作1数据处理使用线性回归分析2绘制曲线以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标3准备标准溶液选择合适的标准物质4测定吸光度使用分光光度计测定

分光光度法的检出限和定量下限检出限指在给定的置信度下，可以检测到的最小浓度或含量。定量下限指在给定的精度和准确度下，可以定量测定的最小浓度或含量。

分光光度法的精密度和准确度0.5精密度指在相同条件下进行多次测定所得结果之间的接近程度。0.05准确度指测定结果与真实值之间的接近程度。

分光光度法的优缺点分析优点操作简便灵敏度高价格相对便宜缺点选择性较差易受干扰需要标准物质

分光光度法的注意事项样品准备确保样品均匀、溶液澄清，避免杂质影响测量结果。仪器校准定期校准分光光度计，确保仪器准确可靠。操作规范严格按照操作规程进行实验，避免误差产生。

分光光度法的校准和质量控制1定期校准使用标准物质或标准溶液进行校准，确保仪器准确性和可靠性。2质量控制样品定期分析质量控制样品，监测仪器性能和方法的稳定性。3记录和追溯记录校准数据、质量控制结果和样品信息，方便追溯和分析。

分光光度法的数据处理数据采集使用分光光度计获得样品的光吸收值。数据校正扣除空白值，并进行其他必要的校正。数据分析使用标准曲线或其他方法进行定量分析。结果报告整理分析结果，并根据需要进行统计分析。

分光光度法的方法验证准确度评估方法测定结果与真实值的接近程度。精密度考察方法在重复测定中结果的接近程度。线性评估方法在特定范围内测定结果与浓度之间的线性关系。范围确定方法能够可靠测定的浓度范围。检出限检测方法能够检测到的最低浓度。定量下限方法能够进行准确定量的最低浓度。

分光光度法的仪器维护和保养定期清洁定期清洁仪器表面和光学元件，防止灰尘和污垢影响测量精度。校准仪器定期使用标准物质对仪器进行校准，确保仪器的准确性和可靠性。维护光源定期更换或清洁光源，确保光源的稳定性和亮度。保存记录记录仪器维护和保养的时间、内容和结果，便于追溯和分析。

分光光度法常见问题及解决措施吸光度值偏高样品浓度过高，稀释样品。比色皿不干净，清洗比色皿。试剂失效，更换新鲜试剂。光源能量不足，调整光源。仪器校准偏差，重新校准仪器。吸光度值偏低样品浓度过低，增加样品浓度。比色皿有气泡，去除气泡。试剂不纯，更换纯度高的试剂。光源能量过强，降低光源能量。比色皿厚度不一致，选择合适的比色皿。标准曲线不线性试剂浓度过高，降低试剂浓度。比色皿不匹配，更换匹配的比色皿。光源能量不稳定，更换光源。仪器校准不准确，重新校准仪器。样品处理不当，优化样品处理方法。

分光光度法在食品检测中的应用成分分析测定食品中蛋白质、脂肪、碳水化合物、维生素、矿物质等营养成分含量。添加剂检测检测食品中色素、防腐剂、甜味剂等添加剂的含量，确保食品安全。污染物检测检测