植物细胞工程的基本原理和技术基础.ppt

**在国内已广泛应用于小麦、水稻及其他植物的花药培养和其他组织培养。****通常需要等前一种化合物完全溶解后再加入后一种化合物，对于易发生沉淀的试剂单独溶解后再与别的已完全溶解的药品混合，同时要慢慢地混合，边混合边搅拌。如大量元素中的硫酸镁、磷酸二氢钾和氯化钙****IAA、IBA、GA、ZT先溶95%酒精再定容；NAA先溶于热水,95%酒精再定容；2，4-D先溶于1NNaOH,再定容；KT、BA先溶于1NHCl,再定容。**高温灭菌会降低pH值(约0.2—0.3个pH值)，因此在配制时常提高pH值0．2—0．3单位。**植株种类及外植体的不同，其最适温度也是不同的。如百合20℃；月季25－27℃；番茄28℃。**光调节植物整个生长发育过程，以便更好地适应外界环境。人们已经逐渐认识到植物的生长发育，即植物种子的发芽、组织分化、花芽分化等广泛地受控于光。植物依赖光控制细胞的分化，及其结构和功能的改变，最后形成组织和器官，这个过程是光形态建成(photomorpho-genesis)的过程，即光控制发育的过程。相反，黑暗中生长的植物表现出各种黄化特征，如茎细而长、顶端呈钩状弯曲和叶片小而且是黄白色，这种现象被称为暗形态建成skotomorphogenesis)。在光形态建成的过程中，光只作为信号激发受体，使细胞内产生一系列的反应，表现为形态结构发生变化。给黄化幼苗一个微弱的闪光，在几小时之内便可以观察到一系列光形态建成的去黄化反应，如茎伸长减慢、弯钩伸展，合成叶绿素等。Lx,又写作lux.光强单位。愈伤组织不需要光照？不同的光因子对不同植物愈伤组织的生长均有不同的效应。周吉源等在石刁柏愈伤组织培养的试验中发现：不同光质处理的愈伤组织生长曲线有一定的差异，各处理的生长曲线相互交叉，15d后，明显可分为2组，蓝光、红光和黄光为1组，增重较快；白光、绿光、黑暗为1组，增重较慢。可见，蓝光、红光对愈伤组织的生长具有明显的促进作用。而倪德祥等曾报道红光不利于凹叶景天愈伤组织的生长。*樱桃的离体生根培养***湿度过低会使培养基丧失大量水分，导致培养基各种成分浓度的改变和渗透压的升高，进而影响组织培养的正常进行。湿度过高时，易造成污染。***?在建立一个新的实验体系时，为了能研制出一种适合的培养基，最好先由一种已被广泛使用的基本培养基(如Ms培养基或B5培养基)开始。当通过一系列的实验，对这种培养基做了某些定性和定量的小变动之后，即有可能得到一种能满足实验需要的新培养基，选择最佳培养基。常用试验方法主要有单因子试验、多因子试验及广谱实验等。

????一、单因子试验在单因子试验中．由于培养基中其他成分都维持在一般水平上，所以只变动一个因子，就可以找出这一因子对试验的影响和影响的程度。例如Ms基本培养基的其他成分和用量都不变，只变动NAA用量对某一培养物生根的影响，这种只研究一个因素的试验就是单因子试验。

生物学试验不同于物理学或化学试验，最显著的差别是在生物学试验中必需设置对照组与试验组，试验组可以有一组或几组，随试验的复杂性而设置，对照组也可能有一组以上。试验中要求对照组与试验组中的试验个体，即植物组织块或其他培养物，必须在遗传性、生理状态、前培养条件等方面，尽可能完全一致。以保证试验结果是来源于试验因子，而不是由于试验材料的不一致导致的。

????试验中各处理一般都要设有一定的重复，以取得可靠的试验结果。随试验规模和要求不同，大多每个项目要有4—10瓶，每瓶至少3块培养物或3丛小幼苗。

????二、多因子试验?对培养基中两个或两个以上因素进行研究的试验称为多因子实验，试验可采用完全试验方案，也可选用正交设计方案，完全试验方案具有均衡完全的特点，各个因子的每个水平都相互搭配，构成了所有可能的处理组合，如研究NAA和6—BA的最佳浓度组合，每个因子各设5个浓度水平(0，0.5，2.5，5，10mg／L)，这两种因子各种浓度的所有组合，就构成了一个具有25项处理的试验见表3—3。完全试验方案试验因子越多，处理数越多，试验越复杂，消耗的精力、物力越多。为了减少试验处理，但又能准确全面地获得试验信息，通常采用正交试验。例如，采用正交设计，在使用此表时就可以安排4个因子，3种水平的试验，一共做9种不同搭配的试验，其结果相当于做了27次种种搭配的试验。正交试验虽然是多因素搭配在一起的试验，但是在试验结果的分析中，每一种因素所起的作用却又能够明白无误地表现出来。因此，一次系统的试验结果，就可以把问题分析得清清楚楚，用有限的时间取得成倍的收获。在组织培养研究中