微生物遗传变异与育种.ppt

ⅰ.适用：样品中目的菌数量不够多时ⅱ.目的：提高样品中目的菌的数量和比例ⅲ.原理：通过控制营养成分或培养条件，使目的菌得以繁殖和/或非目的菌的生长受到抑制ⅳ.方法：②增殖培养（富集培养）控制营养成分维素为唯一碳源，可增殖分解纤维素的菌—可溶性淀粉为唯一碳源，可增殖产淀粉酶的菌种—酒精废水，可以增殖废水利用菌注：多种微生物所利用的碳/氮源不能作控制因素控制培养基pH—细菌、放线菌：中性偏碱，—真菌：偏酸注：但非目的菌的生长不能被完全抑制A控制培养温度B—30℃左右培养，可培殖嗜温微生物C—50～60℃培养，可培殖嗜热微生物，筛选耐热菌株D热处理—增殖芽孢细菌E样品悬浮液经80℃、10分钟处理，杀死营养体，再添加营养培养后可增殖产芽孢细菌1—10%酚数滴：抑制细菌霉菌生长，增殖放线菌3—多粘菌素B：抑制G-细菌2—抗生素：抑制细菌放线菌，增殖酵母、霉菌4—青霉素：抑制G+细菌5—制毒菌素：抑制真菌6—放线菌酮：抑制真菌添加抑制剂③纯种分离目的：将目的菌从混杂的微生物中分离出来，获得纯培养一般方法—稀释平板法(倾注平板或涂布平板)—划线法稀释分离倾注平板划线分离法—组织培养法适用于分离高等真菌及植物病原菌。高等真菌：如香菇→切1小块菌盖→10%漂白粉消毒处理→无菌水冲洗→置琼脂平板上→培养→长出菌丝体或：→悬挂在有琼脂培养基的三角瓶内→培养→长出菌丝体注意：对蔓延性霉菌ⅰ.加1%去氧胆酸钠或山梨醇ⅱ.察氏培养基：0.01%蔗糖，0.1%山梨糖ⅰ.纸片培养显色法滤纸饱浸含有指示剂的液体培养基用接种环接种保湿恒温培养据菌落周围变色圈和菌落直径比值判别目的物产量ⅱ.透明圈法根据琼脂培养上透明圈/菌落直径大小判别目的产物的产量淀粉平板透明圈：淀粉酶碳酸钙平板透明圈：产酸酪素（蛋白）透明圈：蛋白酶平皿反应快速检出法—定性或半定量淀粉平板喷稀碘液：透明圈，液化型淀粉酶支链淀粉平板喷稀碘液：蓝色圈：异淀粉酶无色圈：液化型淀粉酶葡聚糖平板加刚果红：葡聚糖酶123木聚糖平板加刚果红：木聚糖酶4ⅲ.变色圈法变色圈反应普遍性转导的后果：流产转导:指外基因子未重组到受体菌中的不能稳定转导。稳定转导:指外基因子重组到受体菌基因组中的转导;特异性转导(restrictedtransduction)01又称局限性转导，所转导的只限于供体菌染色体上特定的基因。02溶原期时，噬菌体DNA整合在细菌染色体特定部位，噬菌体DNA发生偏差分离，将自身的一段DNA留在细菌染色体上，而带走了细菌DNA上两侧的基因。当其转导并整合到受体菌中，使受体菌获得供体菌的某些遗传性状。所转导的只限于供体菌上个别的基因。03普遍性转导与局限性转导的区别区别要点普遍性转导局限性转导基因转导发生的时期裂解期溶原期转导的遗传物质供体菌染色体DNA任何部位或质粒噬菌体DNA及供体菌DNA的特定部位转导的后果完全转导或流产转导受体菌获得供体菌DNA特定部位的遗传特性转导频率受体菌的10-7转导频率较普遍转导增加1000倍(10-4)溶原性转换(lysogenicconversion)01当噬菌体感染细菌时，宿主菌染色体中获得了噬菌体的DNA片段，使其成为溶原状态时而致细菌获得新的性状。当宿主丧失这一噬菌体时，通过溶源转变而获得的性状也同时消失，如白喉棒状杆菌、A群链球菌、肉毒梭菌、产气荚膜梭菌、霍乱弧菌。02溶源转变与转导的区别溶源转变与转导有本质上的不同，首先是它的温和噬菌体不携带任何供体菌的基因；其次，这种噬菌体是完整的，而不是缺陷的。●细菌的遗传转化(genetictransformation)定义:同源或异源的游离DNA分子(质粒和染色体DNA)被自然或人工感受态细胞摄取,并得到表达的水平方向的基因转移过程。包括自然遗传转化和人工转化两种转化方式。(1)自然遗传转化转化现象在细菌中是一种普遍现象。不同细菌转化过程有一定差异，但是它们都存在几个共同特征，即：感受态指细菌能够从周围环境中吸收DNA分子进行转化的生理状态。①感受态与感受态因子感受态因子是影响感受态的一类蛋白质，这类因子可在细菌间转移，从感受态细菌中传递到非感受态细菌中，可以使后者变为感受态。②供体(donor)DNA与受体(receptor)细胞结合－结合发生在受体细胞特定部位(结合点)－结合过程是一个可逆过程。－对供体DNA片段有一定要求(20000个核苷酸对)③DNA摄取当细