基因工程的基本程序丁.pptVIP

将目的基因导入动物细胞方法：显微注射法程序：(目的基因)表达载体取卵（受精卵）显微注射新性状动物将目的基因导入微生物细胞原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少方法：01用Ca2+处理细胞感受态细胞表达载体与感受态细胞混合感受态细胞吸收DNA分子02思考与探究：01利用大肠杆菌可以生产出人的胰岛素，联系前面有关细胞器功能的知识，结合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要生产人的糖蛋白，可以用大肠杆菌吗？01有些蛋白质肽链上有共价结合的糖链，这些糖链是在内质网和高尔基复合体上加工完成的，内质网和高尔基复合体存在于真核细胞中，大肠杆菌不存在这两种细胞器，因此，在大肠杆菌中生产这种糖蛋白是不可能的。01基因工程的概念基因工程的别名操作环境操作对象操作水平基本过程结果DNA重组技术生物体外基因DNA分子水平剪切→拼接→导入→表达获得符合人们需要的新产品对基因进行操作的“手术刀”、“缝合针”、“运输工具”分别是什么物质？有何作用？基因工程的剪切、拼接、导入、表达的具体过程是怎么样的呢？基因工程的基本操作程序（一）基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定123目的基因的获取剪切：拼接：导入：表达：4基因工程的基本操作程序目的基因：主要指编码蛋白质的结构基因.例如：苏云金杆菌抗虫基因人胰岛素基因种子贮藏蛋白基因植物抗病基因……什么是目的基因？一、目的基因的获取目的基因的来源？1、从自然界中已有的物种中分离2、人工方法合成从基因文库中获取目的基因1利用PCR技术扩增目的基因2获取目的基因的常用方法：从基因文库中获取目的基因1什么是基因文库？2将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因3为什么要构建基因文库？直接从含有目的基因的生物体内提取不行吗？4获取目的基因的常用方法：提示：如果所需要的目的基因的序列完全不知，或只知道目的基因序列的一段，或想从一种生物体内获得许多基因，或者想知道这种生物与另一种生物之间有多少基因不同，或者想知道一种生物在个体发育的不同阶段表达的基因有什么不同，或者想得到一种生物的全基因组序列，往往就需要构建基因文库。如何构建基因组文库和部分基因文库呢？基因组文库：含有某种生物的全部基因部分基因文库（如cDNA文库）：含有某种生物的一部分基因12基因文库种类限制酶基因组DNA基因重组转化细菌体外包装1)基因组文库●基因文库提取某种生物的全部DNA限制酶切割一定大小的DNA片段与载体连接导入受体菌中储存基因组文库部分基因文库（cDNA文库）基因重组反转录酶mRNAcDNA某种生物的单链mRNA反转录酶互补的单链DNADNA聚合酶双链CDNA片段与载体连接导入受体菌种储存CDNA文库依据：目的基因的有关信息。如：根据基因的核苷酸序列基因的功能基因在染色体上的位置基因的转录产物mRNA基因翻译产物蛋白质等特性。如何从基因文库中获取所需要的基因？2、利用PCR技术扩增目的基因——一段已知的目的基因序列通过2n形式扩增获取大量的目的基因DNA复制（体外）碱基互补配对原则4种脱氧核苷酸PCR仪Taq酶（耐热的DNA聚合酶）、引物等目的：原理：原则：原料：场所：条件：过程：a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成___________b、退火（复性55℃-60℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部________。c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，从引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补的________。氢键单链DNA双链DNA链二.基因表达载体的构建质粒DNA分子限制酶处理一个切口形成两个黏性末端或平末端两个切口获得含有相同黏性末端的目的基因DNA连接酶重组DNA分子（重组质粒）同一种(一)过程:科学家在培育抗虫棉时，经历了多次失败，才获得成功。起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体质粒中，然后导入棉花的受精卵中，结果抗虫基因在棉花体内没有表达。然后在插入抗虫基因的质粒中插入启动子(抗虫基因首端)，导入棉花受精卵，长成的棉花植株还是没有抗虫能力。科学家又在有启动子、抗虫基