第二节细胞化学染色检验讲解.ppt

细胞化学(或组织化学)是组织学的一个分支，是在细胞形态学的基础上研究细胞的生物化学成分,及其定位、定量及代谢功能状态的学科。经典细胞化学从1830年问世以来已经逐步完善。经过19世纪中叶重氮染料的应用，到上世纪初已将酶的组化反应显示出来，上世纪50年代对哺乳动物和人白细胞的过氧化酶、碱性磷酸酶、酯酶、溶酶体等染色技术相继出现，并不断完善。近代细胞化学则在此基础上，吸收并运用生物化学、免疫学、细胞生物学和分子生物学的基本原理与技术，从细胞分子水平研究细胞形态与功能的关系。近年来又发展了放射自显影、免疫荧光和免疫酶标等免疫组织化学新技术。对研究核蛋白的合成、细胞动力学、细胞胞浆和膜免疫球蛋白合成、细胞分化抗原表达以及白血病和淋巴瘤的免疫学分型研究中，发挥了巨大的作用。随着杂交瘤技术和DNA重组技术的不断发展和应用，发展了原位杂交细胞化学，通过染色体基因定位、核酸分子原位杂交、原位聚合酶链反应,洞察单个细胞内原癌基因的激活、扩增及表达变化等。细胞化学染色临床应用?辅助判断急性白血病的细胞类型。?辅助血液系统等疾病的诊断和鉴别诊断??观察疾病疗效和预后。?发病机制的探讨。细胞化学染色步骤固定显示复染意义：保持细胞结构及化学成分的不变。目的：使细胞内的蛋白质、酶类、糖类等变成不溶性物质。方法：物理法：干燥火焰化学法：甲醛乙醇甲醇丙酮等。?蒸气固定：甲醛极易挥发、氧化，用40％甲醛进行蒸气固定。?液体固定：将涂片浸在甲醛、乙醇、甲醇、丙酮等固定液中，也可用两种或两种以上固定液混合而成。通过不同化学反应，最终形成稳定有色沉淀，显示出被检测的化学物质。?偶氮偶联法：特异性酯酶染色、非特异性酯酶染色，AcP等。?联苯胺法：过氧化物酶染色。?普鲁士蓝反应：铁染色。?雪夫反应：如过碘酸-雪夫反应。?金属沉淀法：金属及其化合物一般都有颜色，故形成的沉淀物为有色物质，如钙-钴法ALP。复染的目的在于使各种细胞能显示出来以，便于观察。选择复染液的颜色应与有色沉淀的颜色有明显的对比度，既能使细胞结构显示又能清楚地看出细胞化学染色结果。?核着色效果较好：苏木精、核固红、中性红、甲基绿、沙黄等，?浆着色较好:伊红、刚果红、光绿。?阳性率：观察100个需计数的细胞，其阳性细胞的个数，即为其阳性率。?阳性指数：将计数100个细胞中的阳性细胞，按不同强度的细胞个数乘以相对应强度之和。例：（+）×1+（++）×2+（+++）×3+（++++）×4髓过氧化物酶染色（MPO）苏丹黑染色（SBB）中性粒细胞碱性磷酸酶染色（N-ALP）酸性磷酸酶染色（AcP）铁染色特异性酯酶（CE）非特异性酯酶（NSE）糖原染色（PAS）髓过氧化物酶染色

（Myeloperoxidase，MPO）

血细胞所含过氧化物酶主要为髓过氧化物酶(MPO)，MPO是一类糖蛋白，相对分子质量约为150000，是人类中性粒细胞含量最多的蛋白质，约占细胞干重的3%~5%。MPO基因定位在染色体17q11～q22为单拷贝基因MPO的生物合成和加工过程研究发现，无MPO活性。MPO前体还需进一步进入溶酶体，经蛋白切割后才能成熟并具有活性。过氧化酶的实验方法

1958年Washburn复方联苯胺法1965年Kaplow二盐酸联苯胺法1985年血液学国际标准化委员会(ICSH)二氨基联苯胺法（DAB染色法）过氧化酶氨基-甲基卡巴唑染色法二盐酸联苯胺法二氨基联苯胺法二盐酸联苯胺法MPO染色原理细胞颗粒中的过氧化酶，能将过氧化氢中的氧释放出来，氧化二氨基联苯胺（DAB），形成金黄