第五章体液蛋白质检验医学技术系魏碧娜83讲解.ppt

第五章体液蛋白质检验主讲教师:医学技术系魏碧娜老师血液是存在于心血管系统内的一种流动性，外观上为红色，不透明，粘性的液体组织。一、体液蛋白质测定红细胞大分子物质血细胞白细胞血小板(40-45%)血浆(55-60%)H2O(９０-９１%)溶质无机盐阳离子阴离子有机物小分子物质G、尿酸、尿素等血液（体重７－８％）血液的组成与成分蛋白质、多糖等全血、血浆和血清的区别全血＝血浆＋血细胞（有形成分）血浆＝全血－血细胞（含抗凝剂的血液离心后说得的上清）血清＝全血－血细胞－纤维蛋白原－凝血因子（血液凝固后析出的淡黄色透明液体）

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1.定义：血浆总蛋白是血浆中各种蛋白质的总称（P93）3.来源肝生成：绝大多数血浆蛋白质其他组织细胞生成：免疫球蛋白和蛋白类激素（一）血清总蛋白测定2.特点：功能多；数量多；种类多（P93）4.测定方法：5.临床意义（P103）（P104）①维持血浆胶体渗透压——清蛋白②运输功能（脂类、Hb、胆红素、激素、维生素、金属离子、药物）③维持血浆正常pH——缓冲功能④免疫作用（免疫球蛋及补体）⑤催化作用（血浆功能酶；外分泌酶；细胞酶）⑥营养功能⑦参与凝血和抗凝血功能（纤维蛋白原及球蛋白——凝血因子）功能多种类多：约有1000种，有所了解的有500多种。P93分离方法盐析法：2种（白蛋白/球蛋白）电泳法：醋酸纤维素薄膜电泳：5种琼脂糖凝胶电泳：13种聚丙烯酰胺凝胶电泳：30种SDS聚丙烯酰胺凝胶等电双向电泳：300种*定义:加入大量中性盐（(NH4)2SO4、Na2SO4、NaCl等），破坏蛋白质的稳定因素并使从溶液中沉淀析出的现象。原理:破坏蛋白质两个稳定因素：水化膜和电荷层。结果:半饱和硫酸铵沉淀球蛋白，饱和硫酸铵沉淀清蛋白优点:蛋白质不变性盐析法盐析法原理:盐析是由于加入大量的中性盐破坏了蛋白质的水化膜、中和其所带的电荷从而使蛋白质分子聚集而沉淀析出。各种蛋白质的亲水性和带电荷不同，故盐析时所需盐浓度与pH不同。GLB在生理pH下带电荷及水化膜比ALB少，可被较低浓度中性盐沉淀。定义：带电粒子在直流电场中向相反方向移动的现象称为电泳。原理：蛋白质分子在溶液中可带净的负电荷或正电荷，在电场中发生移动。不同的蛋白质分子所带电荷量不同，且分子大小也不同，故在电场中的泳动速度也不同，由此可彼此分离。电泳法(P44)电泳法：醋酸纤维素薄膜电泳：5种琼脂糖凝胶电泳：13种聚丙烯酰胺凝胶电泳：30种SDS聚丙烯酰胺凝胶等电双向电泳：300种分辨率增高4.测定方法(1)凯氏定氮法（参考方法）灵敏度0.2~1.0mg步骤很复杂，请欣赏视频(2)双缩脲法（推荐方法）灵敏度2~10mg实训血清总蛋白测定(双缩脲法)【操作】取3支中试管，按下表进行操作：━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━加入物(ml)空白管标准管测定管───────────────────────标准液0.1蒸馏水0.1血清0.1双缩脲试剂555━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━混匀后，37℃放置10分钟，用分光光度计，在波长540nm下，以空白管调零，测定测定管和标准管的吸光度。【结果计算】待测血清总蛋白（g/L）=AU/AS×CS(g/L)【参考范围】成人:60—78g/L双缩脲法原理蛋白质中的肽键（-CONH-）在碱性溶液中能与Cu2+作用而产生紫红色络合物，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量及氨基酸成分无关。评价优点：简便，准确，重复性好，10g-120g/L线性好，特异性与精密度好，批内CV%＜2%，显色稳定。缺点：灵敏度较差，