小麦快速发育、分子标记辅助育种技术规程.docx

小麦快速发育、分子标记辅助育种技术规程

1范围

本文件规定了小麦快速发育的术语和定义、前期准备、方案确定、快速发育（幼胚培养）、分子标记（辅助目标基因的转育与聚合）、田间辅助选育等技术要求。

本文件适用于快速创制小麦种质及培育小麦新品种。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性应用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注明日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

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DB21/T2339-2014百合鳞片组织培养扩繁技术规程3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

小麦快速发育（RapidWheatdevelopment）

利用人工气候室，依据小麦生长发育特点，去除小麦籽粒灌浆与后熟的发育阶段，加速营养生长阶段，从而缩短小麦生长发育周期。

4前期准备

4.1仪器

4.1.1DNA提取仪器

核酸提取磨样机、水浴锅、移液器（1ML、100ul、10ul）、涡旋仪、低温高速离心机（最高转速10000rpm）和通风橱等。

4.1.2PCR检测仪器

PCR仪、电泳槽及凝胶成像系统。

4.2小麦种植所需设施、生产资料

4.2.1主要设施设备

光温可控温室：可控温度15℃~35℃;光通量密度.100μmol/m2·s，采光或光照时间14h。

人工气候箱：可控温度6℃~25℃,光通量密度.100μmol/m2·s。栽培盆规格：直径25cm*高21cm

育种田：土壤类型为粘土具有良好的肥力，pH值适中（通常在6.0-7.5之间），排水良好，无盐碱化现象；隔离条件，为了防止不同品种之间的交叉污染，育种田应与其他小麦田保持一定的隔离距离，通常建议至少100米以上。

4.2.2生产资料

育苗基质、穴盘、穴盘托等、磷酸二氢钾等常用肥料，百菌清、吡虫啉、菊酯类等常用抑菌防虫药物。

5方案确定

5.1分子标记的筛选及亲本的确定

根据育种目标，利用公共数据库（如：）或文献获得目标基因标记信息及供体亲本，并对这些标记的可靠性进行验证。

5.2亲本的选择

受体亲本选择：当地自然和栽培条件的推广品种，系谱及遗传背景明确，综合农艺性状表现好，且具有较好的配合力，只有少数需改良性状缺陷（质量或主效基因控制的性状）。

供体亲本选择：系谱及遗传背景明确，综合农艺性状表现好，含有与受体亲本互补性状的质量或主效基因。

5.3育种途径的确定

5.3.1转育单个基因

转育单个基因，室内单交(A/B)再连续回交3-4次(BCn)，然后自交2次，BCnF3代以后分子标记辅助田间选择。

5.3.2多个基因聚合

2个基因聚合

亲本各含一个目标基因，室内单交(A/B)后自交2次，F3代以后分子标记辅助田间选择。

3个基因聚合

每个亲本各含一个目标基因，采用复交的方式。一个亲本分别与另外两亲本杂交，杂交后代再杂交(A/B//A/C)，然后自交2次，F3代以后分子标记辅助田间选择。

6快速发育（幼胚培养）

6.1幼穗的选取

取授粉后15d左右的小麦幼穗，选取麦穗中部的6个小穗，去除包被的颖壳备用。

6.2幼粒的消毒

在超净工作台中，用1.5%的次氯酸钠进行表面消毒10～15min，再用灭菌ddH2O冲洗3-4次。

6.3幼胚的获取

用镊子捏住胚乳以固定籽粒，在籽粒顶部找到胚的位置，用另外一只镊子在胚的左右两端稍用力挤压，从而获得完整的幼胚（15d左右的小麦胚为淡黄色）。取胚的过程在无菌超净工作台中进行。

6.4胚苗的培养

将剥离的完整胚，盾片向下接种于PM培养基（附录A）中，每个三角瓶（30ml的PM培养基）接种7～10个幼胚。接种好的幼胚在25°C、16h/d光照培养箱中培养3d。

6.5幼苗的春化

将培养3d的胚苗放入6～8°C、16h/d光照培养箱中，春化30d。

6.6温室内小麦栽培管理

6.6.1供试土壤

取田间中等肥力土与蛭石1:1比例，施入底肥，混拌均匀备用。

田间土壤要求：土壤质地为壤土或轻壤土，有机质含量在1.5%～2.5%之间；土壤pH值在6.0～7.5之间；全氮含量在0.1%～0.2%之间；有效磷含量一般要求在15～30mg/kg之间；速效钾含量在100～150mg/