细胞因子的检测和应用 (2).ppt

细胞因子受体检测技术放射性核素标记重组配体的放射受体分析本方法是确定细胞受体分布及其特性的主要方法，可测定受体的数量及亲和力。通常采用放射性核素示踪，如体外标记重组细胞因子，通过生物合成的标记重组细胞因子的功能不受影响，受体单克隆抗体标记分析技术抗细胞因子受体的McAb既可封闭受体抑制相应细胞因子的生物活性，也可用标记的McAb直接做免疫放射受体分析或免疫共沉淀。第30页，共46页，星期日，2025年，2月5日细胞因子受体检测技术受体cDNA分析酶免疫技术检测法某些细胞因子受体除存在于细胞膜外，尚可分泌进入体液，称为可溶性细胞因子受体（solublecytokinereceptor）,如sIL-2R、sIL-4R和sIFN-γR。这类受体多采用ELISA法检测。重组细胞因子与受体的交联分析利用化学交联剂将标记的重组细胞因子与膜受体交联，细胞裂解物经PAGE电泳后作放射自显影分析，通过带型分析可确定受体的分子量及亚单位。第31页，共46页，星期日，2025年，2月5日三种细胞因子测定方法的比较生物学检测法：比较敏感，直接测定生物学功能，可靠，但需培养依赖性细胞株、耗时长、步骤繁，影响因素多，不易掌握。免疫学检测法：操作较简便、快速、重复性好、尚可测定特定细胞或亚群产生细胞因子的含量，但敏感度比生物学法低10~100倍。免疫学检测法检测的是细胞因子蛋白质的抗原性，可能是无活性的变性分子或细胞因子的裂解片断。分子生物学检测法：只能代表基因表达情况，不能提供细胞因子的浓度及活性等资料。第32页，共46页，星期日，2025年，2月5日生物学活性法免疫学检测法原理生物学活性水平特异性结合反应敏感性一般较高(受体)一般较低(加放大系统可明显升高)特异性低高(识别类型、亚型)(不能)(有可能)周期较长短培养条件大小指示细胞敏感性差异大/指示细胞突变可发生/生物学作用相同因子扰大小样品中特异性或非特异性抑制物干扰大小重复性较差较好标准化、大量检测困难容易第33页，共46页，星期日，2025年，2月5日第1页，共46页，星期日，2025年，2月5日发展历史和命名1966年-巨噬细胞移动抑制因子1969年提出了“淋巴因子”的概念此后，又提出了“单核因子”的概念(由于如此众多的免疫活性因子的发现，且鉴于对其本质尚不清楚，均以其生物学活性命名，致使这些因子的名称相当混乱。)1979年在瑞士召开的第二届淋巴因子国际会议上提出了白细胞介素的概念,并按发现顺序以阿拉伯数字排列。尚有其它细胞分泌的活性介质，如IFN-α和IFN－β分别由白细胞和纤维母细胞产生。目前将所有这些因子统称为细胞因子。第2页，共46页，星期日，2025年，2月5日概述概念细胞因子（cytokine）是指由活化的免疫细胞（包括淋巴细胞和非淋巴细胞）和某些基质细胞分泌的、介导和调节免疫应答及炎症反应的小分子多肽类因子，它们是除免疫球蛋白和补体之外的另一类非特异性免疫效应物质。产生细胞因子的细胞种类很多，但归纳起来主要有三类：①活化的免疫细胞，包括淋巴细胞、单核／巨噬细胞、大颗粒淋巴细胞、粒细胞、肥大细胞等；②基质细胞类，包括骨髓和胸腺的基质细胞、内皮细胞、上皮细胞、纤维母细胞、中枢神经系统的小胶质细胞等；③某些肿瘤细胞系。产生：抗原、致分裂原、感染、炎症等多种因素可刺激细胞因子的产生，各细胞因子之间也有相互刺激合成和分泌的作用。第3页，共46页，星期日，2025年，2月5日共同特点1)正常休止状态的细胞必须经刺激和活化后才能合成和分泌CKs,细胞内无细胞因子前体储存,接受刺激后从激活基因开始至合成,分泌,刺激结束后细胞因子的产生随即停止.。2）绝大多数CKs均为低分子量（4～80kD）的糖蛋白。3）分泌特性：大多数的CKs是通过旁分泌（paracrine），或自分泌（autocrine），少部分通过内分泌的形式作用于远处靶细胞或靶器官；4）多样性：一种细胞可产生多种细胞因子，不同类型细胞也可产生一种或几种相同的细胞因子。5）网络性：协同效应；重叠效应；拮抗效应。6）高效性：它们的受体亲和力高，表现很强的生物学活性，是免疫球蛋白等分子远不能及的。7)非特异性:细胞因子多由免疫细胞在特定抗原或丝裂原刺激下所产生,但其对靶细胞发挥功能却为非特异性,也不受MHC限制.第4页，共46页，星期日，2025年，2月5日3．分类白细胞介素（interferon）IL