基因诊断与基因治疗生物化学.ppt

先设计一对特异性引物，用PCR技术扩增出一383bp序列，再用探针杂交，灵敏度可达到100个细菌水平。结核分枝杆菌幽门螺杆菌（HP）主要采用PCR技术：①检测HP染色体DNA特异片段；②检测HP尿素酶A基因；③用PCR-RFLP鉴别HP菌株。二、细菌引起的疾病疟原虫01卡氏肺孢子虫02衣原体感染诊断方法：核酸杂交和PCR技术03三、寄生虫及衣原体感染肿瘤的基因诊断

GeneDiagnosisofMalignantTumors常见肿瘤的基因诊断乳腺癌结肠癌02原癌基因与抑癌基因的检测01ras基因家族由H-ras、K-ras和N-ras组成。最常见的突变是第12、13、59或第61位密码子的点突变。胰腺癌、结肠癌、肺癌以K-ras突变为主，如第12位密码子突变，由编码甘氨酸的GGT突变为TGT、GTT或GAT，少数突变为GCT。急性淋巴细胞白血病，慢性淋巴细胞白血病等以N-ras突变为主；泌尿系统肿瘤则以H-ras突变为主。原癌基因的检测一、原癌基因与抑癌基因的检测PCR及PCR-SSCP分析：扩增ras基因第12位密码子点突变部位，再用SSCP技术进行分析，或者直接测序确定患者ras原癌基因的点突变。核苷酸杂交技术（如ASO）：检测ras基因第12位密码子点突变。01ras原癌基因突变常用的检测方法02PCR-SSCP分析技术01DNA序列分析02PCR-RFLP分析03p53的基因诊断方法有3．抑癌基因p53的检测基因诊断在法医学上的应用01ApplicationofGeneDiagnosis01inForensicMedicine01重复序列以各自核心序列（重复单元）首尾相连多次重复，称为串联重复序列，其重复次数在人群中存在变异，形成多态性。01串联重复序列散在分布于染色体上。02重复单位6～25bp长，称为小卫星DNA。03重复单位2～6bp长，如（TA）n,(CGG)n等，称为微卫星DNA。04一、DNA指纹与多态性遗传标记人类DNA指纹图个体识别和亲子鉴定：DNA指纹技术是从基因水平检测DNA的高度多态性，个体识别率高。以往在刑事案件的法医学鉴定中应用的是血型、血清蛋白型、红细胞酶型和HLA分型，个体分辨能力不够，只能排除，不能做到统一认证。二、DNA指纹与法医学诊断基因治疗的概念及策略

ConceptandStrategyofGeneTherapy基因治疗：指将目的基因通过基因转移技术（病毒载体介导或者非病毒载体介导的基因转移技术）导入靶细胞内，目的基因表达产物对疾病起治疗作用。狭义基因治疗：指目的基因导入靶细胞后与宿主细胞内的基因发生整合、成为宿主基因组的一部分，目的基因表达产物起治疗疾病的作用。广义基因治疗：①外源正常基因导入病变细胞，产生正常基因的表达产物以补充缺失的或失去正常功能的蛋白质；②采用适当的技术抑制细胞内过度表达的基因；③将特定的基因导入非病变细胞，在体内表达特定产物；④向功能异常的细胞（肿瘤细胞）中导入该细胞中本来不存在的基因（如自杀基因），利用这些基因的表达产物达到治疗疾病的目的。基因治疗分类体细胞(somaticcell)基因治疗生殖细胞(germline)基因治疗只限于某一体细胞的基因的改变只限于某个体的当代对缺陷的生殖细胞进行矫正当代及子代一、基因治疗的基本方法基因置换（genereplacement）01定义：将特定目的基因导入特定细胞，通过定位重组，导入的正常基因，以置换基因组内原有的缺陷基因。02目的：将缺陷基因的异常序列进行桥正。对缺陷基因的缺陷部位进行精确的原位修复，不涉及基因组的任何改变。03STEP3STEP2STEP1定向整合的条件:转导基因的载体与基因组DNA具有相同的序列。带有目的基因的载体就能找到同源重组的位点，进行部分基因序列的交换。基因同源重组技术又称为基因打靶(genetargeting）细胞内基因同源重组的发生率很低。基因同源重组技术定义:通过导入外源基因使靶细胞表达其本身不表达的基因。类型:有缺陷基因细胞中导入正常基因，而细胞内的缺陷基因并未除去，通过导入正常基因的表达产物，补偿缺陷基因的功能；向靶细胞中导入靶细胞本来不表达的基因，利用其表达产物达到治疗疾病的目的。基因增补（geneaugmentation）1基因干预（geneinterference）2定义：3采用特定的方式抑制某个基因的