培养基的配制与灭菌.ppt

这里所指的菌，包括细菌、真菌、放线菌、藻类及其它微生物。菌的特点是：极小，肉眼看不见。无处不在，无时不有，无孔不入。在自然条件下忍耐力强，生活条件要求简单，繁殖力极强，条件适宜时便可大量滋生。010203040506无菌的范畴是：经高温灼烧或一定时间蒸煮过后的物体。经其它物理的或化学的灭菌方法处理后的物体(当然这些方法必须已经证明是有效的)。高层大气、岩石内部。健康的动、植物的不与外部接触的组织内部。强酸强碱，化学元素灭菌剂等表面和内部等等都是无菌的。从以上可以看出：在地球表面无菌世界要比有菌世界小得多。04030102常用的灭菌方法可分为物理的和化学的两类：物理方法如干热(烘烧和灼烧)、湿热(常压或高压蒸煮)、射线处理(超声波、微波)、过滤、清洗和大量无菌水冲洗等措施。化学方法是使用升汞、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、来苏儿、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精化学药品处理。这些方法和药剂要根据工作中的不同材料不同目的适当选用。培养基用湿热灭菌：培养基在制备后的24h内完成灭菌工序。常用方法是：关闭放气阀，通电后，待压力上升到0.05MPa时，打开放气阀，放出空气，待压力表指针归零后，再关闭放气阀。关阀再通电后，压力表上升达到0.1MPa时，开始计时，维持压力0.1～0.15MPa20分钟。12对高压灭菌后不变质的物品，如无菌水、栽培介质、接种用具，可以延长灭菌时间或提高压力。而培养基要严格遵守保压时间，既要保压彻底，又要防止培养基中的成分变质或效力降低，不能随意延长时间。对于一些布制品，如实验服、口罩等也可用高压灭菌。洗净晾干后用耐高压塑料袋装好，高压灭菌20～30min。高压灭菌前后的培养基，其pH值下降0.2～0.3单位。高压灭菌通常会使培养基中的蔗糖水解为单糖，从而改变培养基的渗透压。在8％～20％蔗糖范围内，高压灭菌后的培养基约升高0.43倍。培养基中的铁在高压灭菌时会催化蔗糖水解，可使15％～25％的蔗糖水解为葡萄糖和果糖。培养基pH值小于5.5，其水解量更多，培养基中添加0.1％活性碳时，高压下蔗糖水解大大增强，添加1％活性碳，蔗糖水解率可达5％。为防止高压灭菌产生的上述一些变化可用下列方法：01经常注意搜集有关高压灭菌影响培养基成分的资料，以便及时采取有效措施。设计培养基配方时尽量采用效果类似的稳定试剂并准确掌握剂量。如避免使用果糖和山梨醇而用甘露醇，以IBA代替IAA，控制活性炭的用量(在0.1％以下)注意pH值对高压灭菌下培养基中成分的影响等。02配制培养基时应注意成分的适当分组与加入的顺序。如将磷、钙和铁放在最后加入。注意高压灭菌后培养基pH的变化及回复动态。如高压灭菌后的pH值常由5.80升高至6.48。而96h后又回降至5.8左右。这样在实验中就可以根据这一规律加以掌握。用于无菌操作的器械采用灼烧灭菌玻璃器皿及耐热用具采用干热灭菌不耐热的物质采用过滤灭菌空间采用紫外线和熏蒸灭菌第三章培养基的配制及灭菌培养基及其作用：是向植物细胞提供营养的场所。其作用是向植物细胞提供所需的各种营养；调节渗透压、酸碱度；供给水分。固体培养基还起着支撑作用。MS培养基，其特点是无机盐和离子浓度较高；1B5培养基，其特点是含有较低的铵；2White培养基，其特点是无机盐低，适于生根；3N6培养基，其特点是KNO3和(NH4)2SO4含量较高，适于花药培养；4KM－8P培养基，其特点是有机成分较多，适于原生质体培养。5培养基多以命名人的名字命名。

目前，比较流行的培养基有：培养基的成分：主要可以分水、无机盐、有机物、天然复合物、培养体的支持材料等五大类。大规模生产时可用自来水。但在少量研究上尽量用蒸馏水，防止贮藏过程发霉变质。水：植物原生质体的组成成分，代谢过程的介质和溶媒。01氮：是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的组成成分。供应的氮化物有硝酸铵、硫酸铵、硝酸钾等。有时，也添加氨基酸来补充氮素。磷：是生物膜、核苷酸（如ATP）、核酸的重要组成部分。常用于培养基的磷化物有ＫH2PO4或ＮaH2PO4等。无机元素：大量元素，指浓度大于0.5mmol/l的元素，有N、P、K、Ca、Mg、S等。其作用是：02钾：Ｋ对碳水化合物合成、转移、以及氮素代谢等有密切关系。制备培养基时，常以KCl、KNO3等盐类提供。Mg、S和Ca：Mg是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂；S是含S蛋白质的组成成分。它们常以MgSO4·7H2O提供。Ca是构成细胞壁的一种成分，Ca对细胞分裂、保护质膜不受破坏有显著作用，常以CaCl2·2H2O提供。微量元素：指小于0.5mmol/l的元素，F