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筛选杂交瘤细胞细胞培养筛选课件
汇报人：文小库
2024-01-11
目录
contents
杂交瘤细胞筛选概述
杂交瘤细胞筛选的步骤
杂交瘤细胞筛选的注意事项
杂交瘤细胞筛选的实验操作
杂交瘤细胞筛选的结果分析
01
杂交瘤细胞筛选概述
01
02
杂交瘤细胞筛选是单克隆抗体技术中的关键步骤，能够获得具有高度均一性和特异性的抗体。
杂交瘤细胞筛选是指通过细胞融合技术将免疫细胞与肿瘤细胞融合，筛选出能够持续产生特异性抗体的细胞株的过程。
免疫细胞与肿瘤细胞融合后，形成的杂交瘤细胞既具有免疫细胞的抗体生成能力，又具有肿瘤细胞的无限增殖能力。
通过筛选，选择出能够产生特异性抗体的杂交瘤细胞株，经过克隆化培养和抗体检测，最终获得单克隆抗体。
单克隆抗体能够特异识别抗原，用于诊断和治疗疾病，如癌症、自身免疫性疾病等。
疾病诊断和治疗
免疫学研究
生物制品生产
单克隆抗体技术可用于免疫学研究，如免疫应答机制、抗原表位分析等。
单克隆抗体可用于生产高纯度、高质量的生物制品，如药物、诊断试剂等。
03
02
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02
杂交瘤细胞筛选的步骤
将免疫的B细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞。
细胞融合
通过选择性培养基筛选出融合的杂交瘤细胞，淘汰未融合的细胞。
筛选方法
初步检测杂交瘤细胞是否产生所需抗体。
抗体检测
通过抗体检测结果，挑选出阳性克隆进行扩大培养。
筛选方法
将阳性克隆进行单细胞分离培养，以获得单一细胞的纯培养。
克隆化培养
对阳性克隆进行抗体检测和鉴定，确保其符合要求。
抗体检测与鉴定
细胞扩增
通过克隆化培养，使杂交瘤细胞数量不断增加。
培养条件
为杂交瘤细胞提供适宜的生长条件，如温度、湿度、营养等。
细胞传代
定期将杂交瘤细胞进行传代，保持细胞的活力和生长状态。
采用免疫学技术对杂交瘤细胞产生的抗体进行检测和鉴定。
检测方法
抗体的亲和力、特异性、效价等指标，以及抗体的类别、亚类等属性。
鉴定指标
鉴定后的抗体可用于进一步的研究和应用，如疾病诊断、治疗和药物研发等。
应用价值
03
杂交瘤细胞筛选的注意事项
抗体检测是筛选杂交瘤细胞的重要环节，常用的检测方法有酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫荧光技术和流式细胞术等。
ELISA方法操作简便、灵敏度高，适用于大量样本的检测；免疫荧光技术可用于观察细胞表面抗原的表达；流式细胞术可用于检测细胞表面抗原的定量分析。
阳性克隆是指能够产生特异性抗体的杂交瘤细胞，筛选标准包括抗体分泌量、特异性及稳定性等方面。
抗体分泌量可通过ELISA等方法进行检测，特异性可通过抗原刺激等方法进行验证，稳定性则需要经过多次传代和冻存复苏等实验进行评估。
克隆化培养是筛选阳性克隆的关键步骤，需要选择适宜的培养条件，包括培养基、温度、气体环境等因素。
常用的培养基有DMEM、F12等，根据不同细胞类型选择适宜的培养基。培养温度需维持在37℃，气体环境需保持95%空气（细胞代谢必需的）和5%CO2（维持培养基pH值）。
04
杂交瘤细胞筛选的实验操作
克隆化培养试剂
选择适当的克隆化培养试剂，如有限稀释法或微珠法。
阳性克隆筛选试剂
选择适当的阳性克隆筛选试剂，如HAT选择性培养基。
抗体检测试剂
选择适合的抗体检测试剂，如ELISA或荧光抗体检测。
细胞培养基
选择适合杂交瘤细胞生长的培养基，如HAT培养基。
细胞融合剂
选择适当的细胞融合剂，如聚乙二醇或电融合。
1
2
3
将杂交瘤细胞和骨髓瘤细胞分别进行传代培养。
准备杂交瘤细胞和骨髓瘤细胞
根据实验设计，采用适当的融合方法将杂交瘤细胞和骨髓瘤细胞融合。
细胞融合
通过离心和洗涤去除未融合的杂交瘤细胞和骨髓瘤细胞。
去除未融合的细胞
制备抗原
根据实验目的，制备相应的抗原溶液。
03
培养与筛选
在选择性培养基中培养杂交瘤细胞，通过观察生长情况、抗体产生情况等指标，筛选出阳性克隆。
01
准备选择性培养基
根据实验设计，制备HAT选择性培养基。
02
接种杂交瘤细胞
将已筛选的杂交瘤细胞接种到选择性培养基中。
05
杂交瘤细胞筛选的结果分析
克隆形成率
通过绘制细胞生长曲线了解杂交瘤细胞的生长特性和生长速度。
细胞生长曲线
细胞形态观察
通过显微镜观察细胞形态，评估细胞的健康状态和生长状况。
通过克隆形成率检测评估杂交瘤细胞的增殖能力，选择增殖能力强的细胞克隆进行后续培养。
通过实验比较不同培养基对杂交瘤细胞生长和抗体制备的影响，选择适合的培养基进行大规模培养。
培养基优化
通过调整筛选条件，如抗原浓度、筛选时间等，提高筛选效率和准确性。
筛选条件优化
利用基因工程技术对杂交瘤细胞进行改造，提高抗体的表达量和亲和力。
基因工程改造
感谢您的观看
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