实验二微生物的分离纯化.ppt

——宜宾学院工业微生物与育种学实验——宜宾学院工业微生物与育种学实验——宜宾学院工业微生物与育种学实验——宜宾学院工业微生物与育种学实验1）暂时保藏法——斜面保藏方法：斜面置4℃冰箱保藏，定时传代原理：低温下，微生物代谢强度明显下降优点：适用于各种微生物、简便易行、易

于观察；缺点：保藏时间短、传代频、易退化、易

污染、工作量大。改良方法：橡皮塞取代棉塞、加矿油2）长期保藏法原理：运用干燥、低温和隔绝空气等手段，降低

微生物菌种的新陈代谢速率，使菌种的生

命活动处于半永久性的休眠状态，以达到

长期保存的目的。方法：砂土管法真空冷冻干燥法液氮法1）砂土管法：干法：（适用于部分真菌、放线菌）将斜面上

孢子刮下，接种于无菌砂土管中（砂

装试管2/5)，搅拌均匀。湿法：斜面中加3~5ml无菌水制成菌悬液，取菌

悬液10滴加入砂土管，以管内砂全部湿

润为宜。将砂土管置于干燥器中真空干燥，低温或室温下保藏适用于放线菌、芽孢菌和某些真菌保藏。保藏时间几至几十年。2）真空冷冻干燥法3)液氮超低温保藏法：④真空冷冻干燥法在干燥的条件下又保持真空来保藏菌种。原理：加有保护剂的菌悬液在冻结状态下予以真空干燥，

使微生物细胞处于半永久的休眠状态，以达到长

久保藏的目的。方法：用无菌脱脂牛奶作保护剂，加入3ml于斜面中制成

菌悬液，分装在安瓿中速冻真空干燥。真空度维持在0.1~0.3mmHg,悬液维持冻结状，

水分不断升华，至菌体混合物呈疏松状，熔封。优点：适用于各种微生物；便于大量保藏；可避免污染，

菌种存活时间长（几到几十年）缺点：手续繁琐。⑤液氮超低温保藏法方法：用10%甘油、二甲亚砜或蔗糖和吐温80

作保护剂，将菌种分散于其中，或将长

菌的琼脂块放入保护剂中，熔封后迅速

降温至-35℃。预冻后保存在液氮超低温

冰箱中（-196℃）。优点：适用于各种微生物的较理想的保藏方法缺点：需专门设备使用时速融，30~40℃水浴摇动，融后

以无菌手续开启工业微生物与育种学实验PartⅠ实验基本操作技能实验二微生物的分离纯化内容提要分离纯化形态观察半固体培养基：穿刺接种液体培养基接种普通琼脂培养基：涂布平板，平板划线接种，斜面划线接种浅盘固体接种接种无菌操作：在无菌箱或操作室内无菌的环境下进行划线分离01划线时接种环与平皿约成30-40度角,轻轻接触,以腕力在琼脂表面轻快滑动,不能划破琼脂.03划线为连续划线,不能间断.应占满平皿.划线不能交叉重复.02第一次划线应占平皿面积的1/10,以后每次划线约占面积的1/4—1/5.04每次划完后接种环应灭菌.划线接种注意要点稀释分离涂布平板稀释分离倾注平板厌氧微生物的分离厌氧罐厌氧手套箱厌氧罐厌氧手套箱一般采用NA培养基，加入抗真菌剂(如放线菌酮和制霉素)，掺加浓度一般为50μg／m1，以抑制真菌的生长。01琼脂平板在使用前应置于37℃培养箱中孵育l、2天。02培养基的生物物理学参数，如pH及盐分也应调节到与试样的生态系统参数值相近。03细菌的分离放线菌分离培养需考虑的生态参数：温度、pH、离子强度、氧化还原电势和底物浓度。一般采用高氏1号培养基，大多数放线菌的分离培养是在贫脊或复杂底物的琼脂平板上进行的。除嗜温性放线菌外，其他放线菌一般在培养4-20天内在分离平板上缓慢形成菌落。选择性地添加抗生素，通常加入抗真菌剂制霉菌素或放线菌酮，以抑制真菌的繁殖。利用低碳／氮比的培养基可使真菌生长菌落