结核分枝杆菌鉴定临床微生物检验技术精品资源共享讲解.ppt

*致病性与菌体成分、代谢产物的毒性以及免疫病理损失有关,,,,,致病机制可能是细菌在组织细胞内顽强增殖引起炎症反应、代谢物质的毒性、以及菌体成分引起的免疫损伤有关。*************以判断机体对结核分枝杆菌有无免疫力。*（1）形态学检查---染色镜检！1）直接涂片法2）浓缩集菌涂片法（2）核酸检测---PCR推荐使用结核分枝杆菌鉴定2.直接检查浓缩集菌痰液、尿、粪等涂片染色分离培养4%NaOH、3%HCl或6%H2SO4处理15min离心、沉淀结核分枝杆菌鉴定染色镜检涂片染色（1）抗酸染色法：齐-尼（Ziehl-Neelsen）染色（2）荧光染色法：金胺O染色最常用结核分枝杆菌鉴定齐-尼(Ziehl-Neelsen)抗酸染色原理分枝杆菌细胞壁含脂质较多，染色时与石碳酸复红结合牢固，能抵抗3%盐酸酒精的脱色作用。初染5％石炭酸复红脱色3％盐酸酒精复染碱性美蓝结果分枝杆菌呈红色，其他细菌和背景物质为蓝色抗酸染色步骤结核分枝杆菌鉴定抗酸染色原理碱性复红脱色复染抗酸菌非抗酸菌结核分枝杆菌鉴定热染法冷染法经典方法方便、安全?关于抗酸染色的两种常见方法：结核分枝杆菌鉴定抗酸染色涂片结核分枝杆菌鉴定结核分枝杆菌金胺“O”染色结核分枝杆菌鉴定半定量报告抗酸染色：抗酸杆菌（1000×）荧光染色：抗酸杆菌（450×）未找到抗酸菌00±1~2/300视野1~2/70视野1+1~9/100视野2~18/50视野2+1~9/10视野4~36/10视野3+1~9/视野4~36/视野4+9/视野36/视野涂片镜检的报告方式结核分枝杆菌鉴定浓缩集菌法涂片镜检结果如何向临床报告？结核分枝杆菌鉴定直接涂片时应在生物安全柜中操作！结果应报告：“（未）检出抗酸杆菌”！注意事项?涂片优点：?涂片缺点：敏感性低：通常每毫升含5000-10000条以上抗酸菌才可得到阳性结果，故阳性率低。特异性较低：只能报告“抗酸菌阳性”，不能区分结核和非结核分枝杆菌。傻：镜下只能观察菌体形态，不能辨别死、活菌。假阴性：异烟肼治疗后TB会失去抗酸性！简便、快速、价廉、可作疗效评估结核分枝杆菌鉴定意义：是结核病病原学诊断的“金标准”！是开展进一步检测的基础，如药敏。结核分枝杆菌鉴定3.培养鉴定前处理：目的：杀死杂菌、液化标本方法：4%NaOH法、等培养基选择：罗氏培养基、等接种培养：固体培养法、液体培养法结核分枝杆菌鉴定3.培养鉴定罗-琴培养基馋：含血清、蛋黄、马铃薯、等懒：2-5周丑：菜花样菌落2-5周后结核分枝杆菌鉴定药敏试验生化鉴定染色镜检报告方式培养结果—无细菌生长1+斜面20个菌落以上，占斜面1/4以下2+斜面上菌落生长面积占1/4以上，1/2以下3+斜面上菌落面积占斜面1/2以上，3/4以下4+斜面上菌落生长密集，成菌苔培养结果的报告方式结核分枝杆菌鉴定BACTECMGIT960优点：阳性率更高（较涂片法）报告时间更快：12-14d缩短药敏结果：6-12d结核分枝杆菌鉴定仪器法?培养优点：敏感性：高（较涂片法）特异性：高（较涂片法）可确证：是金标准！疗效评估：最后连续5次培养阴性--“治愈”！药敏：为后续药敏试验提供菌株。结核分枝杆菌鉴定?培养缺点：需时：常达8周！操作：复杂！（较涂片法）成本：高（较涂片法）生化反应噬菌体鉴定法分子生物学鉴定：PCR、及其相关性技术，如PCR-RFLP、SSCP、etal.高效液相色谱法（HPLC）结核分枝杆菌鉴定4.鉴定结核菌素试验结核分枝杆菌抗原检测结核分枝杆菌抗体检测全血干扰素测定法结核分枝杆菌鉴定5.免疫学诊断概念：是应用结核菌素进行皮肤试验来测定机体对结核杆菌是否能引起变态反应的一种试验，以判断机体对结