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2025-02-13 发布于广西
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毕业论文设计

辩论小组：第一小组

辩论人：王生瑞

专业：生物技术

海绵共附生放线菌的别离分类及初步鉴定

论文框架

海绵共附生放线菌的别离分类及初步鉴定

1.1海洋放线菌及其产生的活性物质

1.2海绵及其共生微生物产生的次级代谢产物

1.3本论文研究的目的及意义

2.3海绵共生放线菌的别离方法

2.4放线菌的分类鉴定方法

3.1海绵共生放线菌的别离结果

3.2菌株的分类鉴定结果

2.3海绵共生放线菌的别离方法

海绵样品的采集与处理

别离培养基的选择

放线菌的别离

2.4放线菌的分类鉴定方法

形态学特征和培养特征鉴定

16SrDNA序列分析及其系统发育分析

3结果分析

1对于同一样品，在不同培养基上获得的放线菌数量和种类差异较大，在含有抑制剂的SC淀粉酪素琼脂培养基上别离的放线菌数量多。从菌落表观特征、生长速度、基丝与气丝的形态色泽和孢子特征来看，在SC淀粉酪素琼脂培养基上别离到的放线菌种类也最多。

2实验中从海绵样品中，共别离获得12株放线菌菌株：HNM0046、HNM0047、HNM0048、HNM0050、HNM0051、HNM0055、HNM0060、HNM0061、HNM0064、HNM0071、HNM0080、HNM0083。

高氏一号培养基

SC淀粉酪素培养基

HV培养基

M2培养基

Raffinose-histidinemedium

别离到的放线菌种类

3.2菌株的分类鉴定

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海绵共附生放线菌12株别离菌株在酵母膏麦芽膏培养基〔ISP2〕中生长良好，形成丰富的气生菌丝和基生菌丝，基内菌丝和气生菌丝高度分支，基内菌丝淡黄色，不断裂，孢子丝颜色早期灰色，培养后期变为黑褐色，孢子链呈螺旋状，外表不光滑，有褶皱。放线菌呈分枝丝状，分支较多交错在一起，由基内菌丝、气生菌丝和孢子丝三局部组成，基内菌丝为透明，有较多的分枝；气生菌丝较暗。两种菌丝在不同的焦平面上，可以调节细准焦螺旋分别进行观察。由菌落特征，放线菌的细胞有基内菌丝和气生菌丝的分化，气生菌丝到成熟时又会分化成孢子丝并产生成串的干粉状孢子，这些气生菌丝或孢子丝伸展在空气中，菌丝间一般都不存在毛细管水。这就使放线菌获得其特有的与细菌不同的菌落特征：枯燥、不透明，外表呈紧密的丝绒状，菌落和培养基的连接紧密，难以挑取菌落。这种形态特征特别符合链霉菌属中典型菌株的形态特征。因此，推测这12株菌株可能属于链霉菌属中的成员。

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3.2菌株的分类鉴定

以提取的基因组DNA为模板，以27F、1492R为引物，进行PCR扩增，获得菌株HNM0046、HNM0047、HNM0048、HNM0050、HNM0051、HNM0060、HNM0061、HNM0064、HNM0071、HNM0080、HNM0083电泳结果〔见图7、图8〕。经测序获得菌株HNM0046的16SrDNA近全长序列为1423bp；菌株HNM0047的16SrDNA近全长序列为1420bp；菌株HNM0048的16SrDNA近全长序列为1433bp；菌株HNM0050的16SrDNA近全长序列为1431bp；菌株HNM0051的16SrDNA近全长序列为1431bp；菌株HNM0060的16SrDNA近全长序列为1428bp；菌株HNM0061的16SrDNA近全长序列为1447bp；菌株HNM0064的16SrDNA近全长序列为1428bp；菌株HNM0071的16SrDNA近全长序列为1438bp；菌株HNM0080的16SrDNA近全长序列为1436bp；菌株HNM0083的16SrDNA近全长序列为1426bp。

测得已别离出的这12株菌株的16SrRNA基因序列有效片段长度都在1400bp以上，在Eztaxoon数据库中进行有效种的序列相似性有哪些信誉好的足球投注网站，发现与链霉菌属的菌株高度相关，将每株菌与最相似的标准菌株、以及相似性等做表。

基于16SrDNA序列以及系统发育树分析说明，所有菌株都与Streptomycewuyuanensis在系统发育树上聚在同一个分支上，且序列相似性都在97%以上，最高到达98.57%，而StreptomycewuyuanensisFX61〔T〕/〔JX010725〕是由北京理工大学的张鑫等在2013年1月别离获得，并通过DNA-DNA杂交初步确定为一