临床微生物检验技术精品资源共享附一医院检验科杨滨44讲解.ppt

临床标本微生物学检验（五）

痰液标本的微生物学检验临床微生物检验技术精品资源共享课程附一医院检验科杨滨学习目标１熟悉痰液标本中常见的病原体２熟悉痰液标本采集３掌握痰液标本的微生物学检验痰液标本的检验正常人体下呼吸道是无菌的，但上呼吸道有正常菌群寄居，下呼吸道分泌物（俗称痰）通过上呼吸道排出时会受到正常菌群的污染。经口腔咳出的痰带有多种上呼吸道的正常寄生菌（如草绿色链球菌）。若从患者痰标本中查见致病菌或条件致病菌，提示有呼吸道感染。一、痰液标本的常见细菌革兰阳性细菌化脓性链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌白喉棒状杆菌、结核分支杆菌厌氧菌、放线菌、奴卡菌痰液标本的检验革兰阴性细菌脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、产气肠杆菌、嗜肺军团菌二、标本采集（1）自然咳痰法：冷开水漱口清洗咽喉，咳出痰，置于无菌容器。无痰或痰量极少者可用3%～5%氯化钠5ml雾化5分钟进行导痰。痰标本于2h内送到并接种。痰液标本的检验1.采集方法采集晨痰为最佳。需避免上呼吸道正常菌群的污染。（2）气管镜下采集（3）气管或环甲膜穿刺痰液标本的检验2.标本运送与保存痰液标本采集后立即送检，做结核分枝杆菌和真菌培养时，标本不能及时送检时，可置4℃保存。痰液标本的检验（一）检验程序三、细菌学检验痰液标本的检验（二）检验方法1.涂片镜检不合格痰液标本大量鳞状上皮细胞未见吞噬细胞合格痰液标本大量吞噬细胞未见鳞状上皮细胞涂片检查其一依据100×镜下观察白细胞和上皮细胞数目多少来评定(如表)；其二是初步判定是否有病原存在。分级白细胞（个）上皮细胞（个）A2510B2525C1025痰标本镜下分类注：A、B两种情况的痰标本适合做培养，C不合适，应重新留标本。痰液标本的检验痰液标本的检验有意义的细菌浓度值（CFU/ml）标本有意义的浓度CFU/ml自然咳痰107诱导痰不确定气管内吸取物106支气管肺泡灌洗液104保护性毛刷103支气管灌洗液不做培养痰液标本的检验2.分离培养与鉴定（1）痰标本培养前处理：用无菌盐水将痰洗涤3次，加入等量的1%胰酶溶液（PH7.6)，37oC水浴90min，使痰液均质化后备用。（2）普通细菌的培养：将洗净的痰标本接种于血平板、巧克力平板、麦康凯平板，置35℃培养18～24h，根据菌落特征和形态染色，进一步做生化试验及血清学试验进行鉴定，同时做AST。痰液标本的检验2.分离培养与鉴定（3）结核分枝杆菌的培养：将处理后的标本接种于改良罗氏培养基，置35℃培养，于第1周观察2次，以后每周1次，观察菌落出现的时间与特征，按结核分枝杆菌检验进行鉴定。（4）厌氧菌的培养：将标本接种于厌氧培养基上，在厌氧环境下培养后对细菌进行鉴定。痰液标本的检验（5）嗜肺军团菌的培养：将均质化的痰标本接种于血平板、巧克力平板和BCYE平板，置35℃5%～10%CO2培养48h。根据血平板、巧克力平板不生长、BCYE平板上的菌落特征、形态染色、生化试验等进行嗜肺军团菌鉴定。2.分离培养与鉴定气管内吸取物加等量的N-乙酰-L-半胱氨酸或溶痰剂漩涡震荡30s加0.01ml标本至1.0ml的TSB每个平板涂0.01ml血平皿巧克力平皿麦康凯平皿1：100稀释1：2稀释生长出50个菌落痰液标本的检验支气管肺泡灌洗液将所有标本装入50ml离心管内离心20min，混匀10ml沉淀液，漩涡震荡30s每个平板涂0.01ml血平皿巧克力平皿麦康凯平皿Usepipette.用吸管吸取0.1ml至1mlTSB（1：10稀释）生长出10个菌落制作涂片（细胞离心)痰液标本的检验保护性毛刷将毛刷置于1ml稀释液中震荡30s每个平板涂0.01ml血平皿巧克力平皿麦康凯平皿生长出10个菌落UsePRASifanaerobic若怀疑厌氧菌则使用PRAS制作涂片（细胞离心)痰液标本的检验菌落半定量判断标准1+：原始区＜10个菌落2+：原始区＞10个菌落，第二区＜5个菌落3+：原始区＞10个菌落，第二区＞5个菌落，第三区＜5个菌落4+：原始区＞10个菌落，第二区＞5个菌落，第三区＞5个菌落，第四区＞5个菌落优势菌定义为3+或4+以上痰液标本的检验痰液标