蛋白质分析法.ppt

第1页，共20页，星期日，2025年，2月5日蛋白质纯化为了研究某一种蛋白质，必须首先将该蛋白质从其他蛋白质和非蛋白质分子中纯化出来用于分离蛋白质的最重要的依据分子大小电荷疏水性亲和性重组技术第2页，共20页，星期日，2025年，2月5日凝胶过滤原理：依据蛋白质分子大小的分离方法第3页，共20页，星期日，2025年，2月5日电泳原理：依据蛋白质带净电荷量不同从而在电场中移动速度不同而分离开来第4页，共20页，星期日，2025年，2月5日亲和层析原理：依据亲和性进行分离，如酶与底物、受体与配体和抗原与抗体反应。第5页，共20页，星期日，2025年，2月5日重组技术在一个适合的宿主细胞中过量表达重组蛋白质，产量的提高大大简化纯化过程通过在基因的5’或3’端加入6个组氨酸密码子，形成纯化的标签，可进一步加速纯化进程，这使得含有固定金属离子如可与组氨酸结合的Ni2+的亲和柱上标签通常对蛋白质的功能没有什么影响第6页，共20页，星期日，2025年，2月5日蛋白质测序蛋白质在测序之前首先需要经过水解，得到小肽，然后用自动蛋白质测序仪用Edman降解法测定氨基酸序列第7页，共20页，星期日，2025年，2月5日蛋白质分子质量的测定依据凝胶过滤层析将样品蛋白质洗脱时间与已知标准蛋白的洗脱时间相比可给出样品蛋白的近似分子量SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳可用于确定单个肽链的大小质谱测定极为精确但上限仅几kDa且对蛋白质是破坏性的第8页，共20页，星期日，2025年，2月5日SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定分子量第9页，共20页，星期日，2025年，2月5日X-衍射晶体学和核磁共振X-晶体衍射——X射线可与蛋白质中的电子作用得到特有的衍射图谱，可用于确定晶体中原子的位置第10页，共20页，星期日，2025年，2月5日功能分析基于氨基酸一级序列信息，利用计算机辅助方法进行蛋白质三维结构预测。同源性分析氨基酸序列具有明显的相似性,这种相似性称为序列同源性。具有序列同源性的蛋白质称为同源蛋白质，同源蛋白共有的相似序列称为共义序列。遗传分析可揭示该蛋白质在细胞中的作用－某一蛋白质的基因可通过突变失活或用重组DNA技术删除，进而研究其突变体的表现型，揭示该蛋白质的作用第11页，共20页，星期日，2025年，2月5日蛋白质折叠蛋白质折叠问题被列为“21世纪的生物物理学”的重要课题。研究蛋白质特定三维空间结构形成的规律、稳定性和与其生物活性的关系。大家都知道的疯牛病，它是由一种称为Prion的蛋白质的感染引起的，这种蛋白质也可以感染人而引起神经系统疾病。在正常机体中，Prion是正常神经活动所需要的蛋白质，而致病Prion与正常Prion的一级结构完全相同，只是空间结构不同。这一疾病的研究涉及到许多生物学的基本问题。一级结构完全相同的蛋白质为什么会有不同的空间结构，这与Anfinsen原理是否矛盾？显然这里有蛋白质的能量和稳定性问题。

第12页，共20页，星期日，2025年，2月5日蛋白质组学Proteomicsisthesystematicstudyofalloftheproteinsinacell,tissue,ororganism.proteomicshasbeenusedtoidentifyhundredsofproteinsintheovary,prostate,breast,andesophagusthatincreaseordecreaseascellsbegintogrowabnormally.第13页，共20页，星期日，2025年，2月5日蛋白质组学数据库第14页，共20页，星期日，2025年，2月5日