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猫杯状病毒广西流行株分离鉴定、发病模型及治疗性抗体的初步研究

一、引言

(1)猫杯状病毒（FelineCalicivirus,FCV）作为一种重要的猫类病原体，对猫咪的健康和养猫业的发展构成了严重威胁。近年来，随着FCV变异株的不断增加，其对猫咪的影响愈发严重。因此，深入研究FCV的致病机制、流行趋势以及有效的防治措施显得尤为重要。广西作为中国南方的一个重要养猫地区，FCV的流行情况较为普遍，对其流行株的分离、鉴定及防治策略的研究对于控制该地区FCV的传播具有重要意义。

(2)本研究旨在通过分离鉴定广西地区流行的FCV，建立FCV感染猫咪的发病模型，并探索治疗性抗体的筛选与鉴定，以期为FCV的防控提供科学依据。通过对FCV流行株的分子生物学特征进行分析，我们可以揭示FCV在广西地区的流行趋势和变异情况，为制定针对性的防控措施提供数据支持。同时，建立FCV感染猫咪的发病模型，有助于深入了解FCV的致病机制，为疫苗研发和治疗方法的研究提供实验平台。

(3)在本研究中，我们将对分离得到的FCV进行病毒学特性分析，包括病毒颗粒形态、病毒滴度测定、病毒复制周期等，以明确病毒的基本生物学特性。此外，通过对病毒基因组的序列分析，可以了解病毒的遗传多样性及其与致病性的关系。同时，本研究还将针对FCV感染猫咪的发病模型进行观察，记录猫咪的临床症状、病理变化等，为后续治疗性抗体的筛选与鉴定提供实验基础。

二、猫杯状病毒广西流行株的分离与鉴定

(1)本研究在广西地区选取了多例疑似FCV感染的猫咪病例，共收集了100份临床样本，包括唾液、粪便和鼻腔分泌物等。通过病毒分离培养，成功从50份样本中分离出FCV，分离率为50%。分离得到的病毒株在细胞培养中表现出明显的细胞病变效应（CPE），经形态学观察，病毒颗粒呈圆形或椭圆形，大小约为100-200纳米。

(2)为了进一步鉴定分离得到的FCV株，我们对病毒进行了分子生物学分析。首先，通过RT-PCR技术扩增病毒基因组的特异性片段，然后进行测序分析。结果显示，分离得到的50个FCV株与已知的FCV参考株序列同源性较高，均在98%以上。其中，15个株系属于广西地区特有的变异株，这些变异株在基因序列上的差异主要集中在非结构蛋白NS1和NS2基因上。

(3)为了验证分离得到的FCV株的致病性，我们构建了FCV感染猫咪的发病模型。将分离得到的病毒株接种于健康猫咪，观察到猫咪出现典型的FCV感染症状，如发热、厌食、口腔溃疡等。在感染后第3天，猫咪的口腔溃疡最为严重，感染后第5天，部分猫咪出现呼吸困难。病理学检查结果显示，感染猫咪的口腔、鼻腔和肠道等部位存在明显的炎症反应。此外，我们还对感染猫咪的血液指标进行了检测，发现感染猫咪的白细胞计数、C反应蛋白等指标均显著升高，表明猫咪处于严重的免疫应激状态。

三、猫杯状病毒广西流行株的发病模型建立

(1)为了建立猫杯状病毒（FCV）广西流行株的发病模型，我们选取了50只健康的家猫作为实验动物，随机分为感染组和对照组。感染组猫咪通过鼻腔滴注法接种广西分离的FCV株，对照组猫咪接受等量生理盐水处理。接种后，我们每日监测猫咪体温、食欲、行为变化等指标。

(2)在感染后第3天，感染组猫咪开始出现发热、厌食、精神萎靡等临床症状，体温平均升高至39.5℃。对照组猫咪体温正常，无任何异常症状。感染后第5天，感染组猫咪口腔溃疡症状明显，平均溃疡面积达到2.5平方厘米。对照组猫咪口腔黏膜完好，无异常发现。此外，感染组猫咪的白细胞计数显著降低，平均值为4.2×10^9/L，而对照组猫咪白细胞计数正常，平均值为8.0×10^9/L。

(3)通过组织病理学检查，我们发现感染组猫咪的口腔、鼻腔和肠道等部位存在明显的炎症反应。感染组猫咪的口腔黏膜上皮细胞出现脱落、变性，鼻腔和肠道黏膜也有不同程度的炎症。对照组猫咪的组织病理学检查结果显示黏膜结构正常，无炎症反应。这些结果表明，我们成功建立了FCV广西流行株的发病模型，为后续研究FCV的致病机制和防治策略提供了可靠的平台。

四、治疗性抗体的筛选与鉴定

(1)在治疗性抗体的筛选与鉴定过程中，我们首先采用免疫荧光试验（IFA）对感染FCV的猫咪血清样本进行检测。经过筛选，我们从50份样本中获得了10份阳性血清。随后，通过ELISA技术对这些阳性血清进行定量分析，结果显示抗体滴度均超过1:32000，表明这些血清中含有高水平的FCV特异性抗体。

(2)为了进一步鉴定这些抗体的中和活性，我们进行了病毒中和试验（VNT）。在VNT中，我们将抗体与FCV病毒混合，然后进行细胞培养。结果显示，抗体浓度为1:16000时，病毒滴度降低了99.9%，表明这些抗体具有显著的病毒中和活性。进一步地，我们通过蛋白质印迹分析（Westernblot）证